流动注射化学发光法测定中药材中没食子酸.pdf

第38卷
分析化学( FENXI HUAXUE)研究报告
第8期
2010年8月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
1110~1114
DOI:10,3724/SP.J.1096,2010,01110
流动注射化学发光法测定中药材中没食子酸
方卢秋“李海芳2郑国金2,3
(长江师范学院化学化工学院,涪陵408100)2(清华大学化学系,北京100040
(楚雄医药高等专科学校公共部,楚雄675000
摘要建立快速简便的流动注射化学发光分析法,用于中药材中没食子酸含量的测定。利用酸性介质中
Fe-H12O2体系生成羟基自由基氧化没食子酸产生微弱的化学发光,用罗丹明6G来増敏化学发光。研究了
影响化学发光的各种因素,探讨了可能的机理。结果表明,0.18mo/LHCL,0.04 mol/L FEC],1.0moJ/I.H202
与1.0×10“mo/L罗丹明6G溶液组成最优的化学发光体系,没食子酸浓度在1.0x10-S~1.0x10-2g/L
和0.01-1.0g/L范围内与化学发光强度呈很好的线性关系,r分别为0.9984和0.9947,检出限为3.0
10-g/L。对1.0x10-4g/L没食子酸平行测定11次的相对标准偏差为3.8%。利用本方法成功地测定了中
药材诃子和没食子中的没食子酸含量。
关键词中药材;没食子酸;流动注射;化学发光;罗丹明6G
没食子酸( Gallic acid,Gall),是一种广泛存在于水果和中草药等植物中的天然酚酸类化合物,是中
药材没食子、余甘子、窾青果、红景天和词子等的药效成分,也是一些纯中药制剂的有效成分。没食子酸
具有较强的抗氧化性,具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用,可用于有机合成、涂料、染料、医药等方面,还
可用作食品抗氧剂、防腐剂等2,此外,某些制药工业废水中含有大量的没食子酸会分解产生有机酸、
沼气等,消耗水中的溶解氧,致使鱼虾等水生生物缺氧而室息死亡,造成水质恶化。因此,建立简便、
快速、灵敏的检测方法在食品分析、药物分析、医学研究和环境监测等方面有重要意义。
测定没食子酸多采用高效液相色谱法?、光度法、气相色谱法り、薄层扫描法8?、毛细管电泳
法0,1)、振荡化学反应-脉冲扰动法2和化学发光法,“等。光度法与薄层扫描法的灵敏度较差、线
性范围窄;色谱法和毛细管电泳法需要较复杂、昂贵的仪器设备。化学发光法具有灵敏度高、设备简单、
成本低等优点,是一种方便实用的分析方法。已报道的测定没食子酸的化学发光体系主要有:鲁米诺
氧化剂体系,铈(Ⅳ)-荧光物质体系,甲醛增敏H202氧化没食子酸的化学发光体系。
实验发现,在酸性条件下,Fe“与H2O2反应产生活性极强的羟基自由基(·OI),具有更高的氧化
电极电位。·OH是一种强氧化剂3?,氧化没食子酸产生微弱的化学发光信号。荧光物质能强烈增
敏该体系的化学发光,因此,本实验选择Fe'-1H12O2-岁丹明6G化学发光体系,建立了測定没食子酸的
流动注射化学发光分析法。
2实验部分
2.1仪器与试剂
IFFM-D型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限责任公司);BPCL型超微弱发光分析
仪(中国科学院生物物理研究所);UV-3010、U-3900型紫外可见分光光度计和F-7000型荧光光谱仪
(日本日立公司)。
5.0g/L没食子酸(遵义市第二化工厂)储备液;l.0mol/ L FECI3(成都科龙化工试剂厂)储备液,加
人0.20mol/LHCl:;1.0mol/LHCI(国营重庆无机化学试剂厂)储备液:1.0mol/LH2O2(重庆无机化学
201001-27收稿;2010-04-24接受
本文系重庆市教育委员会科学技术研究项目(No.KJ071304)基金资助
E-mail:flg51021519@163.com
第8期
方卢秋等:流动注射化学发光法测定中药材中没食子酸
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试剂厂),现用现配。0.?lmoL/L罗丹明6G(Rhod6G,美国Fuka公司)储备液。所有试剂均为分析纯,
水为二次蒸馏水
2.2实验方法
流动注射化学发光流路由四路组成。A流路为待测样品或者没食子酸标准溶液;B流路为
1.0×10-4mol/L罗丹明6G溶液,作为载流;C流路为0.18mol/LHCL1,0.04mol/ L FECI3溶液;D流路
为1.0mol/.H202溶液。首先启动蠕动泵,样品或者没食子酸标准溶液由A流路经进样阀按时进样
方式定量并人B流路中的载流,并与C流路和D流路通过三通混合,混合液进人流通池,经信号检测窗
检测化学发光信号,记录化学发光信号强度值,以相对峰高定量。A流路和B流路由一个蠕动泵泵人溶
液,C流路和D流路由另一个蠕动泵泵人溶液。实验参数的设定和数据的处理通过IFFM-D型流动注
射化学发光分析仪的 Remex软件完成。
2.3样品制备
称取干燥的中药材样品25.08,在植物样品粉碎机中粉碎过1mm筛,储于棕色细口瓶中。准确称
取粉碎样品5.00g,加甲醇,索氏提取24h,冷却过滤,以4000r/min离心15min,吸取上清液5mL,在
沸水浴中蒸干,定容到50mL棕色容量瓶中备用
3结果与讨论
3.1化学发光体系的选择与优化
3.1.1金属离子的选择金属离子可以催化H202分解产生自由基,对化学发光性质产生重要影响。考
察了Fe3,Fe2+,Co2',Ni2',Cu2t,Mn2+,Zmn2在不同酸碱性条件下对化学发光信号强度的影响,如
表1。结果表明:当没食子酸浓度为10mg/L,在HCI介质中,Fe与H2O2反应产生强烈的化学发光信号
信噪比和相对化学发光强度值最高。为此,选择Fe3-H202-罗丹明6G构成的化学发光体系进行研究。
表1金属离子对H2O2荧光物质化学发光体系的影响
Table 1 Effect of metal ions in H, O,-fluorescer chemiluminescence system
金属离子/化合物
酸碱性条件
信噪比
相对CL值
Metal ions/compounds
Acid-base condition
Signal-to-noise ratio
Relative CL intensity
Fe/Fecl3 (0.04 mol/L)
0 18 mol/L HCI
280
0. 10 mol/L NAOH
Fe"*/es0,(0.04 mol/L)
0.09 mol/L H2 $0a
1.0
22
nol/L NAOH
Co2*/Cos0,(0.04 mol/L)
0.09 mol/L H SO
0
0.10moレ/ L NAOH
Ni*/Niso,(0.04 mol/L)
0.09 mol/L H2 S0
0. 10 mol/L, NAOH
0. 10 mol/L, NAOH
4.0
Mn2+/Mnso,(0.04 mol/L
n*"/Zn$04(0.04 mol/L)
0. 10 moli, NAOH
3,8
仪器参数( Instrumental parameter):负高压( Negative high- voltage)1.2kV,测量间隔时间( Measurement in