粪大肠菌群检测方法探讨.pdf

第5期(第336期)
吉林水利
2010年5月
[文章编号]1009-2846(2010)05-0098-02
粪大肠菌群检测方法探讨
高凡,蒋懿
(辽宁省水环境监测中心鞍山分中心,辽宁按山114000)
[摘]在水质分析中,采用类大肠菌群滤膜法(CB/T5750.12-2006)所需的仪器简单,操傲简便快逃,适用手地表
水、地下水等杂质较少水样?本文对此实验方法易产生的问题及多响测定値的因隶进行分析,提出了几个关的问题及
放进揹,以提高类大肠茵群刚定的效率及精度。
[关词]旁大肠菌群;滤腹法;M一PC培养基
[中图分类号]S941
[文标识码]B
粪大肠菌群是总大肠菌群的一个亚种;直接截留在膜上,然后将滤膜贴于M一FC培养基
来自粪便,除了它耐热,在44-44.5℃的高温上,在44.5℃进行培养,粪大肠菌群在滤膜上
条件仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚,其他长出具有特征性的菌落,直接计数,通过公式计
特性均与总大肠菌群相同。
算每L水样中含的粪大肠茵群数
总大肠菌群中的细菌除了生活在肠道中外,
潓膜法具有高度的再现性,可用于检验体积
在自然环境中的水与土壤中也经常存在,但这些较大的水样,能比多管发酵法更快地获得肯定的
在自然环境中生活的大肠菌群培养的最适合温度结果。不过在检验浑浊度高、非大肠菌类细菌密
为25℃,如在37℃培养则仍可生长,但如果将度大的水样时,有其局限性。
培养温度上升至44.5℃则不可生长,而直接来1.2培养基
自粪便的大肠菌群,习惯于37℃左右生长,如
M一FC培养基:胰胨10g、蛋白胨5g、酵
将培养温度升高至4.5℃仍可继续生长。因此,母浸膏3g、氯化钠5g、乳糖12.5g、胆盐三号
可用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌1.5g、琼脂12g、1%苯胺蓝水溶液10mL、1%
群与粪便中的大肠菌群区分开。在37℃培养生玫瑰色酸溶波(溶于0.2mol/L氢氧化钠溶液
长的大肠菌群,包括粪便内生长的大肠菌群称为中)10mL、蒸馏水1000mL
“总大肠菌群”( Total colifrom);在4.5℃仍能
将上述培养基中的成分(除苯胺蓝和玫瑰色
生长的大肠菌群称为“粪大肠菌群”( Fecal酸外),置于蒸馏水中加热溶解,调节PH为
colifro),粪大肠菌群细菌在卫生学上具体有重74分装于小烧瓶内,每瓶100mL,于115℃灭
要的意义。
菌20min储存于冰箱中备用。临用前,按上述
粪大肠菌群测定的方法有多管发酵和潓膜配方比例,用灭菌吸管分别加人已煮沸灭菌的
发。这里只讨论滤膜发的测定,该方法所需的仪1%苯胺蓝水溶液1mL及新配制的1%玫瑰色酸
器简单,操做简便快速,适用于地表水、地下水溶液(溶于0.2mol/L氢氧化钠溶液中)1mL。
等杂质较少水样,含量较高时可以通过按比例稀玫瑰色酸高压后会分解,配好的试液应在2
释样品的体积后测定。
10C保存不超过2周,如颜色由暗红变成棕色沉
淀时就不能使用,如培养物中杂菌不多,则培养
概述
基中不加玫瑰色酸亦可
1.3步骤
1.1测定方法原理
3.1过潓水样
滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌
①滤膜及滤器的灭菌;将滤膜放入烧杯中,
(孔径0.4amn)的滤器中,经过抽滤,细菌既被加人蒸馏水,置于沸水浴中煮沸灭菌三次,每次
[收日期]2010-03-29
[作者简介]凡(1980),男,助理工程师,现从事水质监测分析工作
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吉林水利
業大肠菌群检测方法探讨
高凡等2010年5月
15mnin。前两次煮沸后需要换水洗涤2一3次,培养皿成叠入防水袋或容器内,浸没在4.5℃
以去除残留溶剂。也可用121C灭菌10min,士0.5℃恒温水浴中。在培养时间内,装培养皿
10min一到,迅速将蒸汽放出,这样可以尽量减的防水袋必须用重物坠于水面之下,以保持所需
少滤膜上凝集的水分。
的严格温度。所有已制备的培养物都应在过滤后
滤器、接液瓶和墊圈分别用纸包好,在使用30min内浸人水浴内
前先经121℃高压蒸汽灭菌30min。也可以用点
燃的酒精棉球火焰灭菌。
2计算及报告结果
の水样量的选择:水样量的选择是根据所预
测的细菌受检验的特征而和水样中预测的细菌密
粪大肠菌群菌落在MF一C培养基上成蓝色
度而定。如未知水样中粪大肠菌的密度,就应该或蓝绿色,浅蓝色菌落或浅蓝色菌落中心较深的
按下表所列体积过滤,以得知水样中的粪大肠菌菌落也应挑取,其他非粪大肠茵群落呈灰色、淡
群密度。先估计出适合在率膜上计数所应使用的黄色或无色。正常情况下?由于温度和攻瑰酸盐
体积,然后再取这个体积的1/10和10倍,分别试剂的选择性作用,在M一FC培养基上很少能
过滤。理想的水样体积是一片滤膜上生长20见到非粪大肠菌群菌落。必要时可将可疑菌落接
60个粪大肠菌群落,总菌落不得超过200个
种于EC培养液,44.5C士0.5℃培养24h士2h,
使用的水样量可参考表1。
如产气则证明为粪大肠菌群。
表1
记数呈蓝或蓝绿色的菌落,计算出每1L水
接种量(mL)
样中的粪大肠菌群数。
水样种类
100501010.110-210-3
龚大肠菌群茵落数(个/L)
较清洁的湖水、井水
3检验前后的注意事项
一般的江水
河水、塘水
1)采样后水样的正确保存很重要,如保存
城市内的河水
不当可使样品中的大肠菌群细菌死亡或在一定条
城市原污水
件下在生长,这些都将影响检验结果的准确性。
③水样的稀释方法:将水样用力振摇20一检验室接到水样后,应立即检验。如因故不能检
25次,使可能存在的细菌凝团成分状。以无菌验时,应立即置于冰箱内并于2小时内检验。
操作方法吸取10mL充分混匀的水样,注入盛有
2)生活饮用水通常都是经氯处理消的,
90mL灭菌水的三角瓶中混匀成1:10稀释水水中含有一定量的余氯,使大肠菌群处于受损或
样。吸取1:10的稀释液1mL注入盛9mL灭菌受抑制状态,在采集水样时应加硫代硫酸钠脱
水的试管中,混匀成1:100稀释液。按同方法氯,使此受损的细菌得以复苏与修复,从而避免
依次稀释成1:1000、1:10000稀释液。注意:计数结果偏低甚至假阴性出现
吸取不同浓度的稀释液时,必须更换吸管
3)制备大量培养基时,除玻璃器皿外,还
④水样的过滤:用灭过菌的镊子夹取灭菌滤可用、铝锅等容器加热融化,但不可用铜或铁
膜边缘,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床锅,以免金属离子进入培养基中影响细菌生长。
上,固定好滤器。将适量的水样注入滤器中,开
4)将调整PH后的培养基按需要趁热分装
动真空泵即可抽滤除菌。
于三角瓶或试管内,以免琼脂冷。分装量不宜超
1.3.2培养
过容器的2/3,以免灭菌时外溢。分装时应注意
水样抽滤完后,在抽约5s,关上真空泵取勿使培养基黏附于管口和瓶口部位,以免沾染棉
下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在塞而滋生杂菌。
M一FC培养基上,滤膜截留细菌面朝上,滤膜
5)在使用国产的苯胺蓝配制的苯胺蓝溶液
应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡。然时建议加入2mL显色的效果