SNT 3924-2014 出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群检测方法.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T3924-2014
出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群
检测方法
Test method for the enumeration of coliform and fecal coliform
in shellfish for export
2014-04-09发布
2014-11-01实施
中华入
国家质量监督检验检总局发布
SN/T3924--2014
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国福建出人境检验检疫局。
本标准主媭起草人:陈彬、郑晶、陈俊玉、陈舒奕、薛芝敏、黄晓蓉、郑麟毅、董健、林杰、彭华毅。
SN/T3924-2014
出口贝类中大肠菌群、粪大肠菌群
检測方法
范围
本标准规定了贝类中大肠菌群、类大肠菌群计数方法。
本标准适用于双売贝类、生鲜
去
贝肉和半壳冷冻贝类中大肠菌群、粪大所菌
群计数。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB/T4789.20食品卫生做生物检验。水产食品检
GB17378.3海洋监测规范第3部分:样品采集、贮存与运输
SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则
SN/T1538.2培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
大肠菌群 coliforms
需氧及兼性厌氧?能在36℃48h分解乳糖产酸产气的一群革兰氏明性无芽孢杆菌
粪大肠菌群 fecal coliforms
需氧及兼性厌氧,能在4.5℃士05℃,24b发乳糖产酸产气的一群革兰氏阴性无芽孢杆菌,该
菌又可称耐热大肠菌群( thermotolerant conform organisms)。
4检验方法
4.1原理
最可能近似值(MPN)法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培
养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出大肠菌群、粪大肠菌
群在待测样品中的最大可能数
4.2培养基和试剂
4.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤:见附录A中A.2。
4.2.2乳糖(LB)肉汤:见A.3
SN/T3924~-2014
4.2.3煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤;见A.4
4.2.4大肠杆菌(C)肉汤:见A.5。
4.,2.5磷酸盐缓冲液:见A.6。
4.2.60.5%蛋白胨水:A.7。
2.7无菌1mol/1.Na)H:见A.8。
4.2.8无菌1mol/1lHC1:见A.9
4.3设备和材科
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下
a)恒温培养箱:35℃士1℃.;
b)冰箱:2C~5℃;
c)恒温水浴箱:4.5℃土0.2;
d)天平:感量O0.1g
均质器
f)振荡器
g)无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头;
h)无菌锥形瓶:容量500ml
i)无菌培养皿:自径90mm
j)pH计或pH比色管或精密pH试紙
4.4样品的采集
样品的采集及处理按GB17378.3以及GB/T4789.20的规定执行。
4.5样品的制备
称取200g贝肉及壳瓣内液体,放入盛有200mL礫酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的无菌均质杯内
8000r/min~]0000r/min均质1min~2min,或放入盛有200mL磷酸盐缓冲液或0.5%蛋白陈水的
无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:2的样品匀液。贝类样品匀液在均质后
2min构即用磷酸盐绥冲液或0.5%蛋白胨水进行系列样品稀释
4.6样品的稀释
4.6.1样品匀液的pH应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/ L NAOH或1mol/I.HCl调节
4.6.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:2样品匀液1mL,沿管壁绥缓注入9mL磷酸盐缓冲液
或0.5%蛋H胨水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液而),振摇试管或换用1支1mL
无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:20的样品匀液。
4.6.3根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成10倍递增系列希释样品勾液。每递增稀释
1次,换用1支1mL无賄吸管或移液器吸头。从制备样品匀液至样品稀释完毕,全过程不得超过
4.7大肠菌群MPN法的测定
4.7.]初发酵试验
从4.6.3中选择适官的三个连续稀释度的样品匀液,每个稀释度均接种5管月桂基硫酸盐胰蛋白陈
(LST)肉汤或乳糖(LB)肉汤,侮管接种2ml(接种量超过1mL,使用双料I.ST肉汤或1.B?汤),