NYT 1665-2008 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法.pdf

ICS67.100.0
中华人民共和園农业行业标准
NY/T1665-2008
畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠
埃希氏菌的测定酶底物法
Determination of total coliforms and escherichia coli in drinking water
for livestock and poultry-enzyme substrate method
2008-07-4发布
2008-08-10实施
中华人民共和国农业部发布
Y/T16652008
前言
本标准中附录A为规范性附录。
木标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。
本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归ロ
本标准起草单位:农业部食品质量监督检验测试中心(上海
木标准主要起草人:孟墐、郑冠树、张敏、吴榕、韩交交、樊蕴秀、蒋曙光。
/T1665-2008
畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠
埃希氏菌的測定酶底物法
范围
木标准规定了畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的酶底物法测定方法
本标准适用于畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数(MPN)值的快速测定
木方法可同时检测畜禽饮用水中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于木标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件,其最新版本适用于本标准
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
在选择性培养基上总大肠菌群产生的特异性生物晦3-半乳糖苷酶(P-D- galactosidase),将无色的
底物水解为黄色的邻硝基酚(ONP),依此测定畜禽饮用水中总大肠菌群最可能数(MPN)值
在选择性培养基上大肠埃希氏菌产生的特异性生物酶3-半乳糖苷酶(β-D)- galactosidase),使无色
的培养基呈现黄色,同时产生的3-葡萄糖醛酸酶(8- glucuronidase)分解4-甲基伞形-g-D·-葡萄糖
醛酸苷(MUG),使を-甲基伞形酮游离并产生荧光物质,在波长366mm紫外光下产生特征性蓝色荧光,
依此测定畜禽饮用水中大肠埃希氏菌最可能数(MPN)值。
4培养基及试剂
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂:实验用水应符合GB/T6682中三级水的规
4.1培养基
Minimal Medium ONPG MUG(MMO-MUG)培养基,称取以下试剂:
硫酸(NH1)2SO2
硫酸锰(MnSO)
0. 0 ing
硫酸锌(ZnSO2)
g
硫酸镁(MgS(O,)
100.0mg
氯化钠(NaCI
10.0g
氯化钙(CaCl2)
50,0
硫酸钩(Na2S())
40.0mg
两性霉素B( amphotericin B
( mg
邻硝基苯-β-1)-吡喃半乳糖苷(ONPG)
500.0mng
①可选用 Collart或同类市售商品
NY/T16652008
4-甲基伞形啊-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)
g
茄属植物萃収物( solanurn萃収物)
500.0mg
N-2-乙基哌嗪?N-2-乙磺酸钠盐( HEPES钠盐)5.3g
N-2-羟乙基哌嗪N-2-乙磺酸( EIEPES)
g
培养基经过121℃、5min灭菌后,适用于1000mL水样的测定。
4.2灭菌生理盐水
称取8.5g氯化钠(NaCI),用适量蒸馏水溶解稀释至100mL,混匀后取90mL分裴到稀释瓶內
121℃、20min高压灭荣。
5仪器和设备
5.1培养箱:36℃1℃
5.2高压蒸汽灭菌锅
烘箱
5.4定量盘:定量培养用无菌塑料盘,含51个孔穴,每一孔穴可容纳2mL水样。
5.5程控定量封口机。
5.6紫外灯:波长366nm
5.7天平:感量0.01g
6检验步骤
6.1试样制备
检测所需水样为100mL。必要时,可对水样进行10倍稀释,取10mL水样,加人到90mL灭菌生
理盐水(4.2)中,混匀。
6.2定性反应
量取100mL+0.5mI水样(6.1)于100mL.无菌稀释瓶中,加入2.7g士0.5gMMO-MUG培养
基粉末(4.1)混和均匀,放入36℃士1℃的培养箱(5.1)内培养24h。
6.351孔定量盘法
6.3.1量取100mL士0.5mL水样(6.1)于100mL无菌稀释艴中,加入2.7g士0.5gMMO-MUG培
养基粉末(4.1),混摇均匀,使之完全溶解
6.3.2将水样(6.3.1)全部分装在定量盘(5.4)51个孔穴内,抚平定量盐背面以除去孔穴内气泡,用程
控定量封口机(5.5)封口,放入36℃士1℃的培养箱(5.1)内培养24h。
7结果报告
7.1结果判读
培养24h后的水样颜色变为黄色则为阳性反应。如果结果为可疑阳性,可延长培养时间到28h,
再进行结果判读
7.2定性反应
7.2.1.总大肠菌群:培养24h后的水样颜色变为黄色则为阳性反应;否则为阴性反应。定性反应结果
以100mL水样中总大肠菌群检出或未检出报告。
7.2.2大肠埃希氏菌:培养24h后的水样颜色变为黄色的,在暗处用波长为366nm的紫外灯照射,有
蓝色荧光产生判定为阳性反应;否则为阴性反应。定性反应结果以100mL水样中大肠埃希氏菌检出或
未检出报告