CB 3328.1-1988 船舶污水处理排放水水质检验方法 大肠菌群数检验法.pdf

米
全国船舶标准化技术委员会专业标准
CB3328.1~3328.688
船舶污水处理排放水水质检验方法
1988-02-12发布
1989-03-01实施
全国船舶标准化技术委员会发布
全国船舶标准化技术委员会专业标准
船舶污水处理排放水水质检验方法
CB3328.1-88
分类号:U47
大肠菌群数检验法
1适用范
本标准适用于船舶生活污水处理排放水水质的大肠菌群数检验方法,也可用于其他废水、河、海水
等的大肠菌群数的檢验。
原理
大场菌群( coliform group)是…群在35-37C培养24~48h能发酵乳糖,产酸产气的需氧和兼性厌
氧的、革兰氏染色朗性反应的不形成孢子的杆状细菌,其中包括提高温度至4.5士0.2℃培养24h之
内,能产酸产气的滎性大旸杆菌
釆用多管发隊法、以最可能数( most probable number)为指数,即为大肠杄菌类细菌数目的指数。以
MPN表示大肠菌群数.
3培辯基种类及配制
3.1月桂酰胰驃液态培养基( lauryl tryptose broth)(假定试验培养基)
胰摽
生物试剂
20.0
乳糖
分忻纯
磷酸氢二钾KHPO
分析纯
磷酸二氢钾KH2PO
分析纯
氯化钠NaC
分析纯
月桂酰硫酸钠
分析纯
0.1g
蒸馏水
1 L
灭菌前,将上述配好的培养溶液分裟入发酵管中,所加入墆养液的量,必须使培养液在灭薗后还能
淹没发酵管内倒立的小管瓶。所加的培养基配制按表1规定
表1月桂酰胰膘液态培养基的配制
接种水羊
试管内培养基的量
培养基十接种的总量
所需脱水的月酰胰瞟
液态培养基的浓度
10或稍多
11或稍多
35.6
71.2
00
20
213.0
全国船舶菰准化技术委员会1988-02-12批准
1989-03-01实施
cB328.1-8
注意:在任何稀释水中制备细菌悬浮液,不准在室温下停留30min以上。
3.7培养基的戎菌
配制好的培养基,应立即分装到发酵管中,并在2h之内进行灭菌。灭菌温度为121C,并在这一温
度下保持15min。当灭菌气压降至零后,应立即将培养基从蒸汽压灭菌器中取出,冷却,存放备用
3.8培养基的存放
3.8.1成品粉状培养基必须放在干燥、温度低于30℃的暗处,一旦粉末结块状应弃去
3,8-2每次配制培荠基量以一羯内用完为度。存放在避光、温度2~4℃的条件下。存放的发酵管
使用前应预先培养过夜,弃去有气泡的管子,经存放若管内液体损失超过1mL时,也应弃去。
4仪器
4.1隔水式恒温培养箱(流度在20~50℃)
4.2热空气灭烘箱
170±10C
4.る高压蒸汽灭菌器
温度在121℃
4.4峘温水浴锅
4.5电冰箱
4.6药物天平
精确至0.1g
4.7发酵试管5支
155 mm
4.8酒精灯
4.9酸度计(pH计)精度:士0.]个单位
4.10接种器
4.11采样瓶
500mL小口玻璃瓶
4.12其他细菌培养所用的材料:脱脂棉、牛皮纸,绳等
5采样
5.1采样前处理
含游离氯水样的采取。
对于含游离氯的水样,成在水样瓶消毒前就把脱氯剂加入瓶内,硫代硫酸钠(Na,S,O2)或亚硫酸
钠(Na,S0)。加入量根据水样中所含游离氯量确定,定分析按CB3328.3-88《船触污水处理排
放水水质检验方法游离氯和总氧检验法》进行。
5.1.2无氰水样的采取不须加入脱氯剂
5.1.3水样瓶泩涤与消毒
水样瓶洗涤干浄后,应以蒸馏水或去离子水神洗三次。桄涤完毕,消毒前,需加脱氯剂的,加入脱氯
剂,不需加脱氯剂的直接以牛皮纸包封好塞外部。放在高压蒸汽灭菌器中在121C下消毒15ain;或
在170℃千热灭南至少60min
5.2采样程序
用5.1.3消毒过的釆样瓶采样。
采样前,完全打开出水,让其白然流出2~3min,然后节制水流进行采样
采样时,瓶盖所包的纸要和盖成一体拿开,小心避免弄脏,不確手齷瓶塞或抓瓶颈部,应握住近瓶底
部,让水样注入,取样液面距瓶口至少2.5cm,取好样后,当即塞好瓶塞,包封好,送检
5.3水排败存
水样采集后,应立即进行檢验,若1b之内不能检验应放在10℃以下冰箱中暫存不可超过2h。
检验手续
8.1检验种类
a,假定试验
.确信试验
c.粪性大肠杆菌试验
采用A1液态培养基时,不做确信试验。如果假定试验所有发酵管都是阴性反应时不必做确信试
验,即可得到结果为无大肠菌群。通常水样必须作确信试验
船舶污水处理排放水水质的大场菌检验用A-1液态培养基的多管发酵试验检验粪性大肠杆菌。
8.2假定试验
使用3.1培养基或3.5培养基。
6.2.1步骤
a。水样稀释操作(图1)。
山稀释水
转移
水样
这印水」
图1稀释操作
以消过毒的移液管对一系列假定试验发酵管(管内装有3.1培养基)接种水样。每个水样取发
酵管15文组成一个系列,即每5支为同一稀释度接种水样(1mL的十进倍数或约数)。所用稀释水按
3,6条提供。
如果水样用100mL的量,应该先将水样瓶在35℃预温。发酵管内所加水样量应披表1规定。加
入水样后,要充分混合
C.接种后的发酵管,放在35土0.5℃培养。24土2h后,轻轻摇荡毎支试管,并做检验,如果里闻没
有气体产生,应继续培养。在第48士3b时再检查,记录有无气体产生,气体的量不计。
6.2.2解释试验结果
如果在48土3h之内,在管内的发酵管或小管瓶中产生了任何量的气体,便可断定为阳性假定试
验。注意切不可以将发酵管内培养基清晰而含有气泡误为阳性反应。48土3h培养后,仍不见气体产
生。即表示结果为阴性
假定试验步骤详见图2