GB 4789.3-1994 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定.pdf

中华人民共和国国家标准
食品卫生微生物学检验
GR4789.3-94
大肠菌群测測定
代GB4789.3~-84
Microbiologicl examination of food hygiene
Detection of Coliform bacteria
主题内容与适用范
本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的测定。
2术语
大菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来
源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病薗的可
能
食品中大肠菌群数系以100mL〈g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
3引用标准
GB4789,28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
4设各和材料
4.1温箱:36土1℃。
4.2冰箱:0~4℃C。
4.3恒温水浴:4.5土0,5℃。
4.4天平。
4.5显微镜。
4.6均质器或乳鉢。
4.7平皿:直径为90mm
4.8试管。
4,9吸管
4.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL
4.11玻璃珠:直径约5m
4.12载玻片。
4.13酒精灯
4.14试管架。
中华人民共和国卫生部1994-03-18批准
1994-09-01实施
GB4789.3-94
5培弹基和试剂
5.1乳糖胆盐发酵管:按GB4789.28中4.9规定
5.2伊红美蓝琼脂平板:按GB4789.28中4.25規定。
5-3乳糖发酵管:按GB4789.28中4.10规定。
5.4EC肉汤;按GB4789.28中4.11规定。
5.5砗酸盐缓冲稀释液:按GB4789.28中3.22规定。
5.6生理盐水。
5.7革兰氏染色液:按GB4789.28中2.2规定。
6检验程序
大肠茵群检验程序如下:
检样
我胆盐发醵管
36士1℃、24土2h
不产气
大肠?群阴性
伊红美蓝琼脂平板
35土1℃C,18~24h
报告
兰氏染色
乳发酵管
36土1℃,24+2h
革兰氏阳性草兰氏阴性无芽胞杆菌
产气
不产气
大肠菌群阴性
大影曹群阴性
大肠群阳性
报告
报告
报告
7操作步骤
7.1检样稀释
7.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内
GB4789.3·94
瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最
好用均质器,以8000~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL.,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管
内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
7.1.3另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL.灭
菌吸管。
7.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度接种3管。
7.2乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发隊管,1m
1mL以下者,用単料乳糖朏盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36土1℃温箱内,培养24士2h,如所有乳
糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
7.3分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上?置36土1℃温箱内,培养18~24h,然后取出,观
察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
7.4证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36土1C
温箱内培养24士2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠
菌群阳性。
7.5报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
8大肠群( faecal coliform)
8.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃
水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24+2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产
气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置36士
1℃培养18~24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为类大肠菌群阳性。
8.2结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值
大肠菌群最可能数(MPN)检索表
阳性管数
MPN
5%可信限
1mnL(g)×3
0.]mLg)×310.01mL(g)×3
100 ML(%)
下限
上限
<5