SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法.pdf

中华人民共和国进出口商品检验行业标准
SN0169-92
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群
和大肠杆菌检验方法
Method for examination of coliform, fecal coliform
and escherichia coli in food for export
1992-12-28发布
1993-05-01实施
中华人民共和国国家进出口商品检验局发布
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群
SN0169-92
和大肠杅菌检验方法
代替ZBX09002-86
Method for examination of coliform, fecal coliform
and escherichia coli in food for export
1主题内容与适用范围
本标准规定了出ロ食品中大肠菌群、龚大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。
本标准适用于出口食品的检验。
设备和材料
.1吸管:1mL,具0.1mL刻度;5mL和10mL,具1mL刻度
水浴箱:44.5土0.5℃
23培养箱:36土1C,44.5土0.5C。
2.4冰箱:0~5℃和ー15~-20C
2.5均质器
26乳钵和研棒
2.了平Ⅲ;直径90mm。
2.8天平:感量
2.9显微镜
2.10稀释瓶:100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。
2.71玻璃珠:直径约5mm
2.12菌落计数器。
3培养基及试剂
3.1月桂基疏酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤。
3.2煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。
3.3EC肉汤
3.4伊红美蓝琼脂(EMB)。
3.5营养琼脂斜面
3.6色氨酸肉汤
3-7MR-VP培养基.
3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。
3.9结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。
3.10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液。
3.11生理盐水
中华人民共和国国家进出口商品检验局1992~12-28批准
1993-05~01实施
SN0169-92
3.12革兰氏染色波。
3.13 Kovacs氏靛基质试剂
4甲基红指示剂。
3.15 Voges- pros kauer(V-P)试剂。
样品制备
4.1以无操作取有代表性的样品。如有包装则用75%乙醇在开口处擦試后取样。若不能及时检验,
应将冷冻样品置于-15C保存;非冷冻而易腐的食品,应置于4C冰箱保存。检验前冷冻样品可于2~
5C18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。
4.2不同食品样品匀液的制备
4.2.1液体食品
以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL.稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠),以
30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。
4.2.2固体和半固体食品
以无薗操作取25g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于800o/min均质1~2min,制
成1:10样品匀液(也可用灭菌乳缽研磨的方法代替)。
4.3稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释
液,如10-2、10-3、10~?…。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
5大肠菌群的测定
5.1大肠菌群MPN值的测定
5.1.1对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀径度接种三管月梽基硫酸盐胰
蛋白豚(LST)肉汤,每管接种1mL。
5.1.2将接种管置于36士1℃培养48士2h。
5.1.3观察试管的产气情況:检査倒管内是否有气泡产生,记录在24h和48h内产气的ILST肉汤管
数。如所有LST肉汤管均未产气,则可报告为大肠菌群阴性;如有产气者?则进一步作证实试验。
5.2大肠菌群的证实试验
5.2.1将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)内汤管中。
5.2.2置BGLB肉汤管于36土1C培养48士2h。
5.2.3记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
5.2.4结果报告:按BGLB肉汤产气管数,査MPN表〔见附录B(补充件〕报告每克(毫升)样品中大
肠菌群的MPN值
6粪大肠菌群测定
6.1用直径为3mm的接种环将所有48土2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。
6.2将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5士0,5℃水浴箱内,培养24±2h。水浴箱的水
平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为44.5℃产气阳性的大肠杆菌和4:5C不产气的产气肠杆菌或
其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照
6.3记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性;不产气音为粪大旸菌群试验阴性。
6.4结果报告:按产气管数,査MPN表报告每克(毫升)样品中粪大肠菌詳的MPN值。
7大肠杄菌测定
7.1将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h,取其产气管的培养物刘线接种于伊红美蓝(EMB)平板