NYT 555-2002 动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法.pdf

ICS11.220
B 4
NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T555-2002
动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群
和大肠杆菌的检测方法
Detection methods for coliform group, faecal coliform group
coliform bacteria in animal products
2002-08-27发布
2002-12-01实施
中华人民共和国在业部发布
NY/T555-2002
前
言
大肠菌群、类大肠菌群和大肠杆菌是食品卫生的三项重要的卫生指标。当前国际上采用的方法有美
国公职分析化学家协会(AOAC)方法及日本人介绍的煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)和EC试管发酵法。为
满足要求,依照日本采用的BGl-B和EC试管发酵法并进行适当改进,建立了本检测方法。本方法用
B(;LB发酵管检测大肠菌群并计算最大可能数(MPN)值,用EC肉汤发酵管检测糞大肠菌群并计算
MPN值,在检测粪大肠菌群的基础上通过生化鉴定检测大肠杆菌并计算MPN值,鉴定中省去了革兰
氏染色。这些重要改进缩短了检验时间,简化了操作程序,而且经对比试验证明结果可靠,适合于动物产
品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。
本标准的附录A是规范性附录,附录B是资料性附录
本标准由农业部裔牧兽医局提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归ロ。
本标准起草单位:天津动植物检疫局。
本标准主要起草人:秦贞奎、张碧波、侯艳梅、杨金良、薛振源。
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动物产品中大肠菌群、業大肠茵群
和大肠杆菌的检测方法
1范
本标准规定了动物产品中大肠菌群、类大肠菌群和大肠杆菌的检测方法
本标准适用于动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准
2.1
大肠薗群 coliforms; coliform gronp
一群能分解乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌
粪大肠菡群 faecal coliforms; faecal coliforms gronp
44.5C发酵乳糖产气的一群细菌,是用来表示来源于粪便的大肠菌群。
2.
大肠杆 escherichia coli; coliform bacteria
符合大肠菌群和粪大肠菌群定义,用 IMVIC(旋基质、甲基红、维培和西蒙氏柠檬酸盐)生化试验进
步鉴定、四种生化反应结果依次为++ーー和ー+ーー的细菌。
最大可能数 most probable number,MPN
采用多次稀释方法所求得的最近似数,是通过概率计算出来的。
2.5 IMVIC
旋基质试验、甲基红试验、维培(VP)试验和枸酸盐利用试验的缩写。
检測方法
3.1材料准备
3.1.1仪器
吸管,恒温水浴箱,培养箱,匀浆器,100mL、200mL和500mL三角瓶及广口瓶,直径5mm的玻
璃珠。
3.1.2培募基及试剂
配制方法见附录A(规范性附录)
3.1.2.煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB),配制方法见第A.1章
3.1.2.2EC肉汤,配制方法见第A.2章。
3.1.2.3伊红美蓝琼脂(EMB),配制方法见第A.3章。
3.1.2.4甲基红-维培(MR-VP)培养基,配制方法见第A.4章。
3.1.2.5西蒙氏柠檬酸盐培养基,配制方法见第A.5章。
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3.1.2.6旋基质(叫哚)试验培养基,配制方法见第A.6章。
3.1.2.7科瓦克( Kovacs)氏靛基质试剂,配制方法见第A.7章.
3.1.2.8甲基红指示判,配制方法见第A.8章。
3.1.2.9维培(VP)试剂,配制方法见第A.9章。
3.2检测程序
本标准的检测程序见图1
样品制备及稀释
大肠菌群测定
共大及大肠杆菌洲定
BGLB发管
EC肉汤发管
37℃24h
44.5℃」24h
产气(-)
产气(+)
产气(+)
EMB平板
报告阴性
EMB平板
结果
结果
37℃124h
37℃124h
依据典型营落产
气管数报告大原
营养琼平板
依据典产
群MPN
气管报告大
FHMPND2I
37℃I24h
典型曹幕 IMVIC生化试
验、发醇试验
37℃」24h
核对IMVC结果为++ーー、一+ーー和乳发溶产气
落的EC肉汤产气管数。报告大彫杆曹MPN值
图1检潤程序流程图
3.3样品制备
3.3.1无薗操作从动物产品中采取有代性的样品
如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检测,应将冷冻样品置于-15℃冰箱保
存。非冷冻而易腐的样品,应置于4℃冰箱保存。检测前冷冻样品可于2C~-5℃下在18h内,或于
45℃下在15min内解冻。
3.3.2不同样品匀浆液的制备
3.3.2.1液体样品:以无菌吸管取样25mL加人到装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶(瓶内预
置适当数量的玻璃珠)内,制成1:10的样品匀浆。
3.3.2.2固体和半固体样品:以无菌操作取样25g,加人到装有225mL灭菌生理盐水的灭菌匀浆器
内,于8000r/min均浆2min,制成1:10样品匀浆(也可用灭菌乳钵研磨的方式代替)
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