真菌毒素快速检测技术.pdf

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技
分析与检测
真菌毒素快速检测技术
口北京普赞生物技术有限公司供稿
真菌毒素,又称霉菌毒素,是真器(DAD)、荧光检测器(FLD)、质谱门的仪器,故而,酶联免疫法( ELISA
菌在食品或饲料里生长所产生的代谢产检测器(MS)以及电化学检测器(EC)等。和免疫层析法应用更为广泛。
物,对人类和动物都有害。真菌毒素可
薄层色谱法:又叫薄层层析法
酶联免疫技术:酶联免疫吸附剂测
通过饮食进入人或动物体内,引起人或( Thin Layer Chromatography,定法,简称酶联免疫法( ELISA),是
动物的急性或慢性中毒,进而损害机体,TLC),1968年AOAC首次提出利用20世纪70年代发展起来的免疫检测技
造成肝脏、腎脏及神经组织等的伤害。微柱、薄层色谱法测定花生和花生制品术,有直接法、间接法、双抗体夹心法
真菌毒素主要包括黄曲霉毒素、呕中的黄曲霉毒素,此后许多国家也采用等。虽然 ELISA有多种模式,但基本原
吐毒素、玉米赤霉烯酮赭曲霉毒素等。此法作为标准方法,它也是我国的标准理和操作方法是相同的。首先将抗原或
1960年,英国10万多只火鸡因食用被方法。TLC根据真菌毒素能在紫外区域抗体固定到某种固相载体上(现在多为
黄曲霉毒素污染的饲料而死亡,此事件发出特殊荧光的特点来检测真菌毒素,酶标板),并保持其免疫活性,然后将
发生后,真菌毒素才逐渐引起人们的重样品经过提取、柱层析、洗脱、浓缩及待测样品和酶标物(酶标抗体或酶标抗
视。受全球气候变暖、干旱等因素的影TLC分离后,在特定波长紫外灯下照射,原)按不同步骤与固定的抗原或抗体进
响,食用和饲用农产品受真菌毒素污染可观察到荧光。
行反应,再然后将没有发生反应的物质
的现象日趋严重,世界各地对于真菌毒
气相色谱法:一种强大的分离技洗去,最后加入酶的底物。底物在酶的
素污染的报道也日渐增多,玉米、小麦、术,被广泛应用于各类物质的精确定量催化下显色,最终通过显色程度进行定
大麦、花生等谷物以及干果、水果、中检测,但由于许多真菌毒素都是极性化性或定量测定。 ELSA可把抗原抗体免
药材、牛奶等都容易被真菌毒素污染。合物,在进入气相色谱柱前需要采用一疫反应与酶的高效催化作用原理结合起
因此,为减少霉菌污染,真菌毒素检测定的方式进行衍生,因而其在真菌毒素来,因此具有选择性强、灵敏度高、时
手段必不可少,本文全面介绍了真菌毒检测中的应用并不广泛,目前应用气相间短、检测限低等特点。
素的常规检测和快速检测方法。
色谱法检测最多的真菌毒素是玉米赤霉
目前,市场上真菌毒素类酶联免疫
烯酮。
检测试剂盒种类与规格繁多,样品前处
真菌毒素的常规检测方法
理方法也较为多样化。北京普赞生物技
液相色谱或液质联用法:高效液真菌毒素的怏速检测方法
术有限公司(以下简称“普赞生物”)
相色谱法( High Performance Liquid
快速检测真菌毒素一般采用免疫分自成立至今一直致力于真菌毒素快速检
Chromatography,HPLC)和液相-质析方法,此方法的理论基础为抗原抗体测方法的研究,目前已成功研制出黄曲
普联用法(LC-MS/MS)具有分辨率的特异性结合,主要包括放射免疫分析霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、呕吐毒
高、准确性好、灵敏度高、检测限低等方法(RIA)、酶联免疫法( ELSA)素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、T2毒
优点。目前,我国国家标准或行业标准和免疫层析法
◆标准品
加样
中使用较多的也是高效液相色谱法,其等。但因RIA
抗原
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中反相高效液相色谱法较为常用,其流需要使用同位
洗涤
抗体
动相主要为甲醇、乙腈和水或三者组成素标记,有放
H=2
的混合溶液。HPLC可结合多种检测器,射性污染,并?
标抗原
如紫外检测器(uv)、二极管阵列检测且需要用到专
图1酶联免疫技术原理
40食品安全导刊2017年10月
万方数据
分析与检测
素、赭曲霉毒素等酶联免疫试剂盒。与少,进而使红色条
样品垫
金标垫
测试线对照线
其他同类产品相比,普赞生物的产品操带变浅直至无色。
作更为简便快速,40分钟左右即可完利用以上特性,可
成样品检测并收集结果数据,回收率可以在很短的时间内
底板
NC膜
吸水垫
达90%~10%,产品灵敏度和检测限检测到ng/mlL级的
均处于国内领先地位,尤其是黄曲霉各种真菌毒素。
图2胶体金检测測-卡
毒素B1酶联免疫试剂盒,灵敏度可达
免疫学检测的
0.01 ppb o
基础是抗原抗体的
免疫层析法:免疫层析法特异性识别能力,
( immunochromatography)是近年来这也是检测产品
黄曲毒素M
Prme Biot(
检测卡
国内外新兴的一种快速诊断技术,其原质量好坏的根本技
96/
奉得:4-25C
理是将特异抗体先固定于硝酸纤维素膜术。普赞生物经过
的某一区带,当干燥的硝酸纤维素一端多年的不懈努力,
致力生物科技斯
sa保百姓食品安全
浸入样品后,由于毛细管作用,样品将不断筛选、合成和
黄曲等毒素M
沿着膜向前移动,当移动至固定有抗体优化出各种真菌毒
的区域时,样品中相应的抗原即与该抗素类特异性抗原和
体发生特异性结合,通过免疫胶体金或抗体,并研制生产
免疫酶染色可使该区域显示一定的颜出相应的真菌毒素
色,从而实现特异性的免疫诊断。
类检测卡,不仅具有快速、灵敏度高、测效果不理想。普赞生物针对这些问题
目前,胶体金检测技术广泛应用于特异性强、稳定性好、操作简便等特研制出了食用油专用的黄曲霉毒素B1检
真菌毒素类物质的检测,其具有的低成点,而且无需任何仪器设备,结果判断测卡,无需吹干复溶等处理,每个样品
本、操作简便、快速准确等特点已被用直观可靠,适用于现场检测。其中,处理只鸘2~5分钟,具有精确度高、
户及国家相关部门认可。组装成条的胶黄曲霉毒素B1和M1检测卡灵敏度可前处理简单、检测所需时间短等优点。
体金检测卡如图2所示,在一长条形的达到0.5ppb,赭曲霉毒素检测卡灵敏
背板上接从左至右的顺序贴上样品垫、度为5ppb,呕吐毒素检测卡灵敏度为展望
金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)及吸200ppb,玉米赤霉烯酮检测卡灵敏度
目前,国内外都有各类真菌毒素快
水垫。NC膜上偶联有待测物的抗原(测为20ppb。
速检测产品,从质量和技术上讲,国内
试线, test ine,T线)以及二抗(对
使用胶体金检测卡进行检测时,大公司生产的酶联免疫试剂盒和胶体金检
照线, control line,C线),将抗体偶部分时间都用在样品的前处理上,所以提测卡与进口产品的差距越来越小,甚至
联纳米级的金颗粒放置在金标垫上。从高样品前处理效率可以在很大程度上缓解部分指标已经超越进口产品,畜牧相关
样品垫处滴加样品,开始反应后,随着检测人员的压力并降低成本。以食用油样行业和监管部门也已高度认可了这两类
样品液的流动,偶联抗体的金颗粒流向品为例,植物油容易受到黄曲霉毒素污检测产品。虽然大部分用户的检测需求
抗原处,当抗原抗体结合使偶联的金颗染,其中又以花生油和玉米油更为严重