GB 4789.3-1984 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定.pdf

中华人民共和国国家标准
UDC818-24548.9
:78.51,4
食品卫生微生物学检验
GB4789.3-4
大肠菌群测定
Mlcroblological examination of food hygiene
Detection of Coliform bacteria
大肠菌群系指一群在37℃24小时能发醇乳糖、产酸、产气、編氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞
杆菌。该菌主来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生
学意义。
食品中大肠群数系以每100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
设备和材料
1.温箱:36±1℃。
1.2水浴:44±0.5℃。
1.8天平。
1,4显微鏡
1.5.均质器或乳钵。
1.8温度计。
1.7平皿。
1.8试管。
1.9.吸管。
1.10载玻片。
2培养基及试剂
2.1乳糖胆盐发酵管:GB4789.,28-84《食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂》中
2.2伊红美蓝琼脂GB4789,28-84中3.23。
2.8乳糖发酵管:GB4789.28-84中3.10。
2.4蛋白陈水:GB4789,28-84中2.13。
2,5旋基质试剂;GB4789.28-84中2.13。
2.8。革兰氏染色液:GB41789,28-84中1,2。
3检验程序
大肠菌群检验程序如下。
中华人民共和国卫生部1984-12-25发布
1985-04-01突施
Ga4789.3-84
2A土2h
36+:1C
不产
产气
大肠群阴性
伊红美蓝琼脂平板
36±1C
18~24h
报告
氏染色
乳发醵管
6±1C,24±2h
革兰氏阴性
革兰氏阳性
尤苹胞杆
产气
大肠南群阴性
大肠蘭群阴性
报告
大肠菌群阳性
报告
报告
4操作步骤
4.1检样稀释
4.1.1以无菌操作将检样25m(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃
瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨作成1:10的均匀稀释液。固体
检样最好用均质器,以8000~1000rmin的速度处理1mjin作成1:10的均匀稀释液。
4.1.2用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1mnl,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试
管内,振摇试管混匀,作成1:100的稀释液。
4.1,3另取1ml灭菌吸管,按上项操作依次作10倍递増稀释液,每递増稀释一次,换用1支1ml
灭菌吸管。
4.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个龝释度接种3管
4.2乳发酵试验
将待检棦品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及
1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管、置6±1℃温箱内,培养24±2h,如
所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
4.3分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18~24h,然后取出
观察菌落形态,并作革兰氏染色和正实试验。
4.4证实试验
GB4789.384
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36
1℃温箱内培养24±2h观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告
为大肠菌群阳性。
4.5报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,査MPN检索表,报告每100mn1(g)大肠菌群的最可能数。
类大肠群( faecal coli for m)
5.1检样希释
见4
5.24℃乳糖发试验
将检样以无薗操作接种于乳糖胆盐发酵管内(1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管;1m及
1ml以下者,可用单料乳糖胆盐发酵管),置44土0.5℃水浴内,培养24±2占经培养后,如所有乳
糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为阴性。如有产气者,则按下列程序进行。
5.3.证实试验
将所有产气发酵管,分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃培养18~24h,并同时接种蛋白
陈水,置44±0,5℃培养24h。
经培养后,在上述平板上观察有无典型落生长,并做革兰氏染色镜检。在蛋白陈水内加人旋基
质试剂约.5ml,观察旋基质反应。
5.4结果评定
凡靛基质阳性,平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性
5.5报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100m』(g)粪大肠菌群的最可能
数
大肠菌最可能数(MPN)检索表
阳姓管数
95%可信限
M PN
100 mi( g
1ml(g)×310.1ml(g)x30,01ml(g)x3
上限
90
60
0
3
90
120
160