GB-T 19524.1-2004 肥料中粪大肠菌群的测定.pdf

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ICS65.080
B10
中华人民共和国国家标准
GB/T19524.1~-2004
肥料中龚大肠茵群的测定
Determination of fecal coliforms in fertilizers
2004-05-31发布
2004-10-01实施
质量监
中国国家标准化管理奏员会发布
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GB/T19524.1-2004
前言
本标准的附录A、附录B为规范性附录。
本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。
本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心。
本标准主要起草人:曹风明、沈德龙、李俊、姜昕、李力。
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GB/T19524.1-2004
肥料中粪大肠茵群的测定
范围
本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2定义
下列定义适用于本标准
粪大肠菌群 fecal coliforms
群在44.5℃0.5℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克(毫升)肥料样品中粪大肠菌群的最可能数(MPN)
3仪设备
高压蒸汽灭菌器;显微镜;恒温水浴或隔水式培养箱;恒温旋转式摇床;干燥箱;天平;酸度计或精密
pH试纸;接种环;试管(15mm×150mm);小套管(杜兰管);移液管;三角瓶;培养皿;载玻片;玻璃珠;
酒精灯;试管架
培养基和试剂
4.1培养基:遵照附录A的规定。
4.2革兰氏染色液:遵照附录B的规定。
5检验步骤
5.1样品稀释
在无菌操作下称取样品10.0g或吸取样品10mL,加入到带玻璃珠的90mL无菌水中,置于摇床
上200r/min充分振荡30min,即成10'稀释液。
用无菌移液管吸取5.0mL上述稀释液加入到45mL无菌水中,混匀成102稀释液。这样依次稀
释,分别得到10-3,104等浓度稀释液(每个稀释度须更换无菌移液管)。
5.2乳糖发酵试验
选取三个连续适宜稀释液,分别吸取不同稀释液1.0mL加入到乳糖胆盐发酵管内,每一稀释度接
种3支发酵管,置44.5℃士0.5℃恒温水浴或隔水式培养箱内,培养24h士2h。如果所有乳糖胆盐发酵
管都不产酸不产气,则为粪大肠菌群阴性;如果有产酸产气或只产酸的发酵管,则按5.3进行。
5.3分离培养
从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线,置36℃土1℃条件
下培养18h~24h。
5.4证实试验
从5.3分离平板上挑取可疑菌落,进行革兰氏染色。染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性;如果为革
兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中,置44.5℃士0.5℃条件下培养24h士2h。
观察产气情况,不产气为粪大肠菌群阴性;产气为粪大肠菌群阳性。
5.5结果
证实试验为粪大肠菌群阳性的,根据粪大肠菌群阳性发酵管数,査MPN检索表,得出每克(毫升)
肥料样品中的粪大肠菌群数。
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GB/T19524.1-~-2004
附录A
(规范性附录)
培养基
A.1乳糖胆盐发酵培养基
蛋白胨
20.0g
猪胆盐
g
乳糖
10.0g
0.004%溴甲酚紫水溶液25.0mL
蒸馏水
1000mL
H值
制法:将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中,校正pH,加入溴甲酚紫水溶液,然后分装试管,每
管9mL,并放入一支倒置的小套管,高压灭菌115℃、15min。
注1:初发酵培养基。
注2:类大肠菌群细菌发酵乳糖产酸产气使培养液由紫色变成黄色,套管内充有气体
A.2伊红美蓝琼脂培养基
蛋白胨
乳糖
10.0g
磷酸二钾(K2HPO4?3H2O)2.0g
琼脂
20.0
2%伊红Y水溶液
20,0mL
0.65%美蓝水溶液
10.0ml
蒸馏水
l000m
pH值
制法:将蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾溶解于蒸馏水中,校正pH,投人琼脂并加热溶解,分装于三角瓶
中,高压灭菌115℃、15min备用。伊红和美蓝溶液分别高压灭菌121℃、20min。临用时加热熔化培养
基,冷却至50℃~55℃,加入无菌的伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板
4.3乳糖发酵培养基
蛋白胨
20.0g
乳糖
0.004%溴甲酚紫水溶液
25.0mL
蒸馏水
1000mL
pH值
7.2~7.4
制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加人指示剂,按检验要求分装3mL~5mL,并放人1支
倒置的小套管,高压灭菌115℃、15min。
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