GBT 18869-2002 饲料中大肠菌群的测定.pdf

ICS65.120
B46
中华人民共和国国家标准
GB/T18869-2002
饲料中大肠菌群的测定
Determination of coliform bacteria in feeds
2002-09-24发布
003-03-01实施
中华人民共和,国发布
国家质量监督检验检疫点局
GB/T18869-2002
前言
本标准在查阅大量资料文献和样品检测的基础上制定。
本标准的制定其技术内容主要依据GB4789.3~1994《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》。
本标准的附录A、附录B均为规范性附录
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。
本标准由国家饲料质量监督检验中心《北京)负责起草。
本标准主要起草人:李丽蓓、饶正华、杨曙明、高生。
CB/T188692002
饲料中大肠薗群的测定
警告一一使用本标准的人员应有正规实验室工作的实哦经验。具备适当设备的实验蜜オ能承担检
验。应小心处理所有废弃物。
1范围
本标准规定了料中大肠菌群的测定方法。
本标准适用于配合恫料、浓缩饲料、饲料原料(骨粉、肉骨粉、鱼粉、乳清粉等)中大肠菌群的测定
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的
修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是
否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB4789.28-1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
GB/T14699.1饲料采样方法
3原理
将试样稀释至适当浓度,用乳糖胆盐发酵培养基,在(36士1)℃下培养(24土2)h,根据确证试验为
大肠菌群阳性的管数,査出每100g(mL)试样中大肠菌群的最大可能数(MPN)。
4试剂和材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或相当纯度水。
以下试剂制备具体要求见附录A。
a)乳糖胆盐发酵培养基:见第A,1章。
)伊红美蓝琼脂平板:见第A,2章
c)乳糖发酵培养基:见第A,3章。
d)磷酸盐缓冲稀释液:见第A.4章。
e)生理盐水
)革兰氏染色液:见第A,5章。
5仪器、设备
5.1培养箱:36℃士1℃。
5.2显微镜:普通生物显微镜。
5.3均质器或乳钵。
5.4平皿:直径为90mm
5.5试管。
5.6吸管:lmL。
5.7广ロ三角瓶:容量为500mL
5.8玻璃珠:直径约5mm。
5.9载玻片。
GB/T18869-2002
5.-10酒精灯。
5.11试管架。
6采样
按照GB/T14699.1的要求执行。采样器具要灭菌消毒。
分析步骤(见附录B
7.1检样稀释
7.1.1以无菌操作将试样25g(或mL)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内
(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研蘑做成1:10的均匀稀释液。固体试样最
好用均质器,以8000r/mnin-~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管
内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
7.1.3另取1mL.灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释,毎递增稀释一次,换用一支1mL.灭菌
吸管。
7.1.4根据对试样污染情况的佔计,选择三个稀释度,每个稀释度接种3管。
7.2乳发酵试验
将待检试样接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL.及
1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。毎一稀释度接种3管,置36C土1C培养箱内,培养24h士2h,如
所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
7.3分离培养
将产气的发酵管分别转接种在伊红美蓝琼脂平板上,置36C土1C培养箱内,培养18h~24h,然
后取出,观察薗落形态,并做确证试验
7.4确证试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1个~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36C
士1℃培养箱内培养24h士2h,观察产气情況。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报
告为大肠菌群阳性
7.5报告
根据确证为大肠菌群阳性的管数,査MPN检索表(表1),报告每100g(ml)试样中大肠菌群的最
大可能数,以“个/100g(mL)”表示。
表1大肠茵群最大可能数(MPN)检索表
阳性管效
MPN
95%可信限
1ml.g)×30.1mLg)×3「0.O1ml.(g)×3(10oml.(g)试样
土限
下限
120