长蛸胚胎发育过程中可溶性蛋白含量及组成变化.pdf

第28卷第4期
海洋学研究
VO. 28 No 4
2010年12月
JOURNAL OF MARINE SCIENCES
D
2010
文章编号:1001-909X(2010)04-0065-05
长蛸胚胎发育过程中可溶性蛋白
含量及组成变化
詹萍萍,王春琳”,张晓梅,母昌考,宋微微
(1.宁波大学生命科学与生物工程学院,守波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江宁波315211)
摘要:利用显微镜观察长蛸 Octopus variabilis Sasaki胚胎的发育过程,并采用生物化学方法对长蛸
胚胎发育过程中可溶性蛋白的含量及组成变化进行分析和研究。结果显示,可溶性蛋白含量及组成
变化与其胚胎发育的过程密切相关。在胚胎发育过程中,可溶性蛋白的含量呈先上升后下降的趋勢。
随着胚胎发育的进行,可溶性蛋白的组成由高分子质量向低分子质量的蛋白转化,相对分子质量为37
kDa的谱带从黑珠期起缺失,相对分子质量为47kDa的新谱带在器官形成期时出现,黑珠期和胚胎
逆转期新谱带的表达量增加,相对分子质量为44.5kDa的新谱带在黑珠期时出现,相对分子质量为
41kDa的新谱带在胚胎逆转期时出现。可溶性蛋白含量及组成的这些特征变化,可作为胚胎发育早
期营养代谢的指标,指导人工育苗生产,提高胚胎孵化率。
关键词:长蛸;可溶性蛋白;胚胎发育
中图分类号:S917.4
文献标识码:A
物机体组织可溶性蛋白进行研究,但是关于长蛸胚胎
发育过程中的可溶性蛋白含量和组成变化方面的研究
长蛸( Octopus variabilis Sasaki,俗称章们、潮,尚无报道。。本文在观察长蝉胚胎发育过程的基础
隶属于头足纲、八腕目、蛸科、蛸属(章鱼属),为沿岸
上,采用生物化学方法对长蛸胚胎发育过程中叮溶性
底柄种类,在我的渤海、黄海、东海、南海和口本群蛋白的含量及组成的变化进行研究,目在了解长蝉早
岛海域均有分布。长的背养丰富、肉味鲜美,盤汁期胚胎发育过程中的背养代谢特点,提高胚胎孵化率
中含有抗瘺物质,经济价值极高,深受消费者的青
为未来恢复长蛸自然资源的研究等提供理论依据。
睐に。出于长期的过度捕捞,长蛸资源在逐年衰
材料和方法
退。口前已有研究者对长蛸的人工养殖进行研究,并
几在长蛸苗种培育技术等方面已取得了成功。
1.1样品采集及处理
蛋白质不仅是生物体生命活动的物质基础,还是
实验亲本为2009年5月在浙江省守海县三『」湾
调控其生理代谢的信息载体。因此,对生物机体可溶白然水域中采集。选取质量好、活力强、性腺发育成
性蛋山含量变化的研究,既可以反映纽织内蛋山质合熟度高、质量为90~130g的雌性长蛸作为亲体,于
成利消耗的动态过程,也可以反映在外界坏境变化时室内水泥池中暂养,暂养池上方盖上色遮阻?。暂
机体蛋白质所呈现的反成。目前し有研究者対水生动养期间,每天换水60%,连续充氧;投喂招潮蟹、厚
收稿日期:2010-0114
修回日期:20100625
基金项目:国家“十ー五”科技文撑计划资助项目(2007BADO43B05)
作者简介:求萍(1985-),女,宇本溪市人,倾士,主要从事水产动物繁殖生物学研究。E-mail:pingpingzhan07(のhotmail.com
通讯布著立教,博导,教授,Emai! ngchunlin(c nbu.cdu,cm
(66?
海洋学研究
28卷4期
蟹、小杂蟹等,何天清污,捞残饵。长蛸在陶罐中产卵
25
后,连同其所息的陶罐一同移入化池,在26~29
℃条件下孵化,每天换水1次。
参照 MARTHY和张学舒?对蛸类胚胎发育
10
过的研究,并利用显微鏡观察,分别在以下6个时
佃红江
期进行取样:Ⅰ.受精卵、卵裂期;Ⅱ.襞胚、原历胚期;
信0
Ⅲ.器官形成期;V.红珠期;V.黑珠期:Ⅵ.胚胎逆转
胚胎发育分期
期。每个胚胎发育时期収3颗卵?放入离心管,于分
T.受精卵、卵製期;.胚、原肠胚期:Ⅲ.器官形成期;
析天平上称取混质量,-75℃超低温冰箱中保存。
2红珠期;V.黑球期;M.胚胎逆转期
収不同发育时財的新鲜胚胎样品0.3g左右,川
图1长蛸胚胎发育各期可溶性貨白的含量
入2mL裂解液,冰浴匀浆1min,4℃冰箱静置1h
zygote, cleavage phase; ll blastula, gastrula phase
10000g冷冻离心1h,取上清液,其中一部分用于胚
ll. organogenesis phase; M. hongzhu phase:
胎可溶性蛋白含量的测
部分用于可溶性蛋白
V. heizhu phase: V. inversion phase
Fig 1 Soluble proteins content in embryonic development
组成和相对分子质止的测定,分装后于-75℃保存。
stages of Octo pus variabilis Sasaki
1.2实验方法
可溶性蛋白组成及相对分子质量
1.2.1可溶性蛩白含量的测定
长蛸还胎发育过程中6个时期的可溶性:蛋白
使用购白南京建成生物工程研究所的考'斯売 SDS-PAGE电泳结果表明(图2),从受精卵期至胚胎
蛋白测定试剂盒测定可溶性蛋日含。测试时重逆转期,电泳图谱上的条带逐渐增多,即可溶性蛋白
复3次,测试数据经 Excel2003统计分析软什进行整的种类逐渐増加,表叨其可溶性蛋白的组成随着胚胎
理统计,结果用“平均值士标准差”来表示
发育而有所变化。总的来说,长蛸胚胎可溶性蛋白的
可溶性蛋白组成和相对分子质量的测定
种类较多,几以相对分子质量(Mr)为115kDa以上
用滎丙烯酰胺凝胶电泳法测定胚胎发育过程中的高分子质量蛋山为主,相对分子质量为67~83kDa
的可溶性蛋山纽成和相对分子质量,方法如下:样品及26~31kDa区也有所分布。
与上样缓冲液(配方:0.1mol/ L Tris,体积分数为
ⅢVVWⅥI
40%SDS,体积分数为20%廿油,体积分数为0.05%
溴酚蓝)以1:1的体积比混合,电泳时使用体积分数
260
为5%的浓缩胶和体积分数为8%的分离胶。按相同
135
的可溶性蛋白含量上样,浓縮电压为60V,分离电压
为110V。指示染料一溴蓝距底部1cm时停止
电泳,用固定液固定30min,再用考马斯亮藤G250
染色20h,用水脱色。选用蛋白标准相対分子质量依
次为:260,135,95,72,52,42,34,26kD)a。用关国
Bio-rad公司的凝胶成像系统进行处理和分析。
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结果与分析
1.受精卵、卵裂期;l.囊胚、原肠胚期:业.器官形成期;I.红珠期
V.黑珠期;Ⅵ.胚胎逆转期;M.标准貨门村对分子质量
2.1可溶性蛋白含量的变化
图2长蛸胚胎发育各期可溶性蛋白8%
长蛸胚胎发育过科梨中可溶性蛋白含量的变化如
SDS-PAGE凝胶电泳图
zygote, cleavage phase: Il blastula, gastrula phase;
图1所示。出图1可