同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中的双酚A、壬基酚及辛基酚.pdf

第40卷
分析化学( FENXI HUAXUE)研究简报
第4期
2012年4月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
534~538
DOI:10.3724/SP.J.1096.2012.11057
同位素稀释液枏色谱-串联质谱法测定
动物性食品中的双酚A、王基酚及辛基酚
牛宇敏1张晶2张书军3邵兵”2
首都医科大学公共卫生与家庭医学学院,北京100069)
2(北京市疾病预防控制中心,食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室,北京100013)
(科技部21世纪议程管理中心,北京100038)
摘要建立了动物性食品肉、蛋和奶中双酚A、王基酚和辛基酚的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/
MS)检测方法。比较了固相萃取法(SPE)和凝胶渗透色谱法(GPC)两种前处理技术,探讨了前处理过程中目
标化合物背景污染的来源。最终采用乙酸乙酯环己烷(1:1,V/V)超声提取,经GPC净化后进行超高效液相
色谱串联质谱分析。3种日标化合物的线性范围为0.25~1600gL,相关系数R2>0.999对肉和鸡蛋样品,方
法的定量限(LOQ)为0.2ugkg;奶粉样品的LOQ为0.4ugkg。目标化合物在3个不同水平的加标回收率为
859%~117.0%,RSD<20%。应用本方法对市售动物性食品肉、蛋和奶进行了分析,壬基酚的检出率最高,含
量为0.27~1357?gkg,此外还检出了双酚A
关键词动物性食品;凝胶渗透色谱;双酚A;壬基酚;辛基盼;超高效液相-串联质谱
引言
双酚A( Bisphenol A,BPA)、壬基酚( Nonylphenol,NP)和辛基酚( Otcylphenol,OP)已被证明具有内
分泌干扰效应?,BPA作为生产塑料的原料,NP和OP作为增塑剂和表面活性剂原料等被广泛用于各种
产品,可通过多种途径污染食品。目前在纯浄水以及鱼虾等水产品り、肉及肉制品、奶类及谷物門等
多种食物中都检测到这类物质。BPA、NP和OP的亲脂性较强,易在高脂肪、高蛋白的动物性食品中富集。
联合国粮食与农业组织世界卫生组织( FAO/WHO)专家会议对30篇文献进行调研,发现高脂肪食物中
BPA的含量高于其它食物;Lu等リ对台湾466件食品进行调査,发现肉类的NP和OP含量高于其它食品
监测BPA等污染物在动物性食品中的存在水平具有重要意义。
NP和BPA在环境中普遍存在,有研究者报道 Milli-q超纯水中BPA的浓度约为1~8pg/L12?。此
外,样品预处理实验用塑料器皿和橡胶制品等都会迁移出大量NP和BPA8明,对分析结果造成干扰。
Kuch等明在对地表水和饮用水中的环境雌激素酚类物质进行分析时,用二次蒸馏水或反渗透水作为质
量控制样品,结果在过程空白中检出200~400pgL的OP、NP和BPA。在食品分析方面,尽管目前已有
大量的文献报道了检测方法,但是有关分析过程中的质量控制涉及较少,其后果可能导致监测数据失
真,造成评估过程中食品安全风险的误判。鉴于此,本实验在探讨不同样品处理过程提取效果的同时,
考察了实验操作中目标化合物背景污染的来源,最终采用凝胶渗透色谱(GPC)净化,同位素稀释超高效
液相色谱-串联质谱技术( UPLC-MS/MS)分离检测,实现了肉、蛋、奶中痕量BPA、NP及OP的同时测定。
2实验部分
2.1仪器和试剂
Waters ACQUITY超高效液相色谱仪、 Xevo M TQ质谱仪(美国 Waters公司); Milli-q超纯水机(美
国 Millipore公司); CHIIST ALPHA2-4, Ldplus型冻干仪(德国 CAIIST公司); BUCHI Mixerb-400均质器
(瑞士 BUCHI公司); Accuprep MPS凝胶渗透色谱仪(美国J2 Scientific公司)》;4011型数字旋转蒸发仪
2011-0919收稿;2012-01-16接受
本文系卫生行业科研专项(No.200902009)和“十二五”国家科技支據计划(No.201lBAK10B06)资助项目
*e-mail:shaobingch(@sina.com
第4期
牛宇敏等:同位素稀秤液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中的双酚A、壬基酚及辛基酚
(德国 Heidolph公司); Sep-pak NH2(500mg,6mL), Sep-pak Silica(500mg,6mL)和Sep- Pak Florisil
(500mg,6mL)固相萃取柱(美国 Waters公司); Varian NE2(500mg,6mL)固相萃取柱(美国 Varians公
F): Cleaner NH,, Cleaner PSA, Cleaner Silica, Cleanert Florisil, Cleanert Pesticarb Cleanert Alumina N
填料(天津 Agela Technologies公司); Supelclean LC- Florisil填料(美国 Supleco公司)。
甲醇(LC-MS级,徳国 Merck公司),乙腈、乙酸乙酯、环己烷、甲基叔丁基醚、丙酮和正己烷(HPLC级,
美国 Dilkma公司);无水Na2SOa(分析纯);氨水(28%~30%,u/,比利时 Acros Organics公司);双酚A
(985%,德国 Dr Ehrenstorfer Gmbh公司),4NP(日本 Tokyo Kasei Kogyo公司),4-OP(99%,美国 Sigma-
Aldrich公司);同位素内标BPA-d4,4nNP-d4和4-n-OP-d1(纯度均大于9.8%,加拿大CDN公司)
2.2标准溶液的配制
分别准确称取10mg标准品,以甲醇溶解并定容至10mL,配制成1000mgL的标准储备液,于
-20℃保存。临用时用甲醇稀释成不同浓度的标准工作液,于4℃保存
2.3样品前处理
动物肌肉样品用组织捣碎机捣碎均匀,鸡蛋去壳后于100mL烧杯中用玻璃棒搅拌均匀,液态奶样
品冷冻干燥后研磨均匀,奶粉样品直接称取。分别称取肌肉、鸡蛋和奶粉样品4.0、4.0和2.0g,于50mL
玻璃离心管中,加入10mL乙酸乙酯-环已烷(11,V/の涡旋混匀,超声提取15min,于4℃以3000r/min
离心15min,取5mL上清液用于GPC净化。GPC采用苯乙烯树脂 Biobead SX3(300×10mm)凝胶色
谱柱,流动相为乙酸乙酯一环己烷(1:1,V/V),流速3.0mL/min。收集12.5~17.3min组分于100mL鸡心
瓶中,在30℃以120r/min旋转蒸发至干,加1mL甲醇。
实验中所用的器具均为玻璃材质,使用前在马弗炉中400℃烘烤4h。GPC及液相色普串联质谱仪
的管线均为不锈钢或聚四氟乙烯材质。每10个样品做一个溶剂空白。
2.4色谱一质谱条件
色谱和质谱分析条件采用本课题组已建立的方法。色谱柱: ACQUITY UPLCIMBEH C(50mmX
2.1mm,1.7um);捕集柱: Waters Isolator Column(P/N:186004476);柱温:40℃;流动相:A相为甲醇
B相为0.1%(o/o)氨水;流速:03 MIL/mir;梯度洗脱程序:0~2.0min,35%A线性升至90%A;2.0~
5.0min,90%A线性升至999%A,保持1.9min;7.1min回到初始流动相,保持4min;进样量5uL。
离子源:电喷雾离子源,负离子模式(ES