气相色谱内标法测定水产饲料中的脂肪酸.pdf

2015年1月
中国粮油学报
Vol 30, No. 1
第30卷第1期
Journal of the Chinese Cereals and Oils Association
Jan.2015
气相色谱内标法测定水产饲料中的脂肪酸
张凤枰·罗彬月杜雪莉曹静刘耀敏
(通威股份有限公司水产畜禽营养与健康养殖农业部重点实验室,成都610041)
(上海海洋大学食品学院,上海201306)
摘要建立以十三烷酸为内标物,气相色谱定量测定水产饲料中脂肪酸含量的方法。饲料样品中的油
脂经酸热法提取、氢氧化钾-甲醇皂化、三氟化硼-甲醇甲酯化后行生为相应的脂肪酸甲酯,以SPM-2560
毛细管柱分离,氢火焰离子化检测器测定,保留时间定性、峰面积内标法定量。结果表明,在所选择的色谱条
件下,37种脂肪酸甲酯在65min内获得较好的分离:9种主要脂肪酸加标回收率(n=6)为88.4%~107.5%
相对标准偏差为2.28%-4.79%,最低定量限(S/N=10)为2.0mg/kgo该方法操作简便、快速、重复性好,适
合批量水产饲料样品脂肪酸的定量测定。
关键词气相色谱内标法脂肪酸水产饲料
中图分类号:S816.2文献标识码:A文章编号:1003-0174(2015)01-(0136-05
鱼类能量主要来源于脂肪酸的分解代谢,亚麻标示值相差较大。本试验采用酸热法一次提取饲
酸、二十碳五烯酸(FPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等料中的油脂,内标法定量测定水产饲料中脂肪酸含
长链多不饱和脂肪酸为鱼类细胞膜结构和功能所需量,旨在简化前处理步骤,缩短检测周期,为水产饲
要,是前列腺素(PC)、白细胞三烯(LT)和脂氧素等料脂肪酸的质量控制提供简便、快速、准确可靠的
的前体,在调控细胞代谢和鱼类生理功能方面具有检测方法
重要生理功能。季文娟研究结果表明EPA
DHA对中国对虾的繁殖力具有特殊的作用,亲虾饲1材料与方法
料中必须含有适量FPA、DHA,才能保证亲虾正常的1.1仪器、试剂和材料
产卵和卵质。吉红等?研究表明饲料HUFA具有抑
7890A气相色谱仪,配7683B自动进样器、FID
制草鱼脂质合成及向肝组织的脂质转运、降低肝胰
检测器美国 Agilent科技有限公司 Allegra64R冷冻
脏脂质及腹腔脂肪的沉积、提高草鱼抗氧化能力的离心机:美国 Beckman Coulter公司。
作用。水产饲料生产企业一般在饲料生产过程中派
Supelco37种脂肪酸甲酯混合标准溶液(10
加大豆油、鱼油、藻粉等脂肪源,以满足鱼虾对脂肪mg/mL),十三烷酸(C13:0)、豆蔻酸(C14:0)、棕榈
酸特别是长链多不饱和脂肪酸的生理需求。因此,酸(Cl6:0)、棕桐榈油酸(C16:1)、硬脂酸(C18:0)、油
脂肪酸含量已成为国内外水产饲料品质控制重要指酸(C18:1n9c)、亚油酸(Cl8:2n6)、亚麻酸
标之一。脂眆酸的測定方法有气相色谱法-、液相(C18:3m3)、ニ十碳五烯酸(C20:5n3)、二十二碳六
色谱法、气相色谱质谱联用法-。、液相色谱质谱烯酸(C22:6n3)等10种脂肪酸及其甲酯标准品(纯
联用法-、红外光谱法山四等,国家标准方法
度≥99%)、13%~15%三氟化硼-甲醇溶液:美国
规定了饲料中的脂肪酸含量测定方法,该法采用索 Sigma- Aldrich公司。
氏抽提法得到饲料油脂后,外标法定量测定各种脂
水产饲料样品四川当地饲料市场采集。
肪酸的含量,检测周期长,操作步骤繁琐,且对于添1.2方法
加微藻等原料的水产饲料,若采用该法测定脂肪1.2.1标准溶液的配制
酸,不能完全提取藻粉中的油脂,測定结果与产品1.2.1.1十三烷酸内标溶液
基金项目:四川省科技支撑计划(2011N10071)
准确称取适量十三烷酸标准品,用甲醇配制成
收稿日期2013-09-29
作者简介:张凤枰,男,1972年出生,高级工程师,食品饲料质量
0.0mg/mL溶液,充分摇匀备用;准确称取适量十
安全检测
三烷酸甲酯标准品,用异辛烷配制成0.25mg/mL内
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第30卷第1期
张凤枰等气相色谱内标法测定水产饲料中的脂肪酸
标溶液,充分摇匀备用。
2结果与讨论
1.2.1.2脂肪酸甲酯标准溶液
2.1水产饲料油脂提取方法的选择
准确称取适量十三烷酸、豆蔻酸、棕榈酸、棕榈
饲料油脂的提取方法有索氏抽提法、酸水解
油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸
索氏抽提法,因从饲料经销商了解到,本试验采集
ニ十ニ碳六烯酸等10种脂肪酸甲酯标准品适量,月的部分水产饲料样品中添加了DHA藻粉,在试验设
异辛烷分别配制0.25、5.0、50.0、50.0、5.0、50.0、计时就采用酸水解一索氏抽提法測定样品粗脂肪含
50.0、5.0、5.0、5.0mg/mL的混合储备液,充分摇匀量,结果见表1,6个样品所得粗脂肪測定结果均大
备用。
大低于产品标示含量,这可能是因为试验样品添加
1.2.2色谱条件
了ー定量的DHA藻粉,采用常规的酸水解法未有效
色谱柱: Supelco SP"-2560石英毛细管柱,100破坏DH∧藻粉的细胞壁,所用石油醚极性弱提取
m×0.25mm×0.20pm;汽化室温度:250℃检测效果不理想。试验参考了文献5]酸热法,利用盐
器温度:260℃;色谱柱初始温度60℃,以4℃/min酸对细胞壁中糖及蛋白质等成分的作用,在60℃水
升至160C,再以2℃/min升至240℃:载气高纯浴中振荡30min,使原来结构緊密的细胞壁变得疏
氮;柱流速1.0mL/amin;尾吹流速:40mL/min;氢气松,再经沸水浴及-20℃速冻处理,使细胞盛进一步
流速:3mL/min:;空气流速:350mL/min;分流比被破坏,再用极性较强的三氯甲烷一甲醇混合溶剂
10:1进样量1uL
有效地漫提出DHA藻粉细胞中的油脂。事实证明
1.2.3样品前处理
酸热法所得粗脂肪测定结果与产品标示含量基本
1.2.3.1饲料油脂的提取
致,所得油脂中的DHA含量与酸水解一索氏抽提法
参考酸热法叫,稍作改动。准确称取饲料样品相比大大提高,进一步说明酸水解一索氏抽提法不
1.0g(精确至0.0001g),置50mL.离心管中,加入能充分有效提取DHA藻粉中的油脂。
10.0mg/m.十三烷酸内标溶液0.5ml,4mol/I.盐表12种油脂提取方法脂眆测定结果比较/e/100g8
酸6mL,漩涡混匀1min,置于60℃恒温振荡水槽,
样品
酸水解一索氏
抽提法
酸热法
产品标示值
100r/min振淓30min,沸水浴煮5min,-20℃速冷
饲料1号
后加入20mL三氯甲烷-甲醇(1:1)混合溶剂,漩涡
饲料2号
12.4
混匀2min,5000r/min离心10min,取氯仿层,加等
饲料3号
饲料4号
体积的0.1%氯化钠溶液,混匀,5000r/min离心10
饲料5号
8.0
min,取氯仿层移至干燥的100mL三