GBT 16550-2008 新城疫诊断技术.pdf

ICS11.220
B41
中华人民共和国国家标准
GB/T16550-2008
代替GB165501996
新城疫诊断技术
Diagnostic techniques for newcastle disease
2008-12-31发布
2009-05-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发
中国国家标“准化管理委员会
布
GB/T16550--200
前言
本标准对应于世界动物卫生组织(OIE)《陆生动物卫生法典》(2006版)2.7.13“新城疫”和《陆生动
物诊断试验和疫苗手册(哺乳动物禽鸟与蜜蜂)》(206版)2.1.15“新城疫”,且与该章节的一致性程度
为非等效。
本标准代替GB16550-1996《新城疫检疫技术规范》
本标准与GB16550-1996相比主要变化如下
对标准名称进行了修订,修改为《新城疫诊断技术》;
删除了原标准中属于行政执法行为的内容;
对血凝和血凝抑制试验进行了修改;
增加了脑内接种致病指数(ICPD、静脉接种致病指数(IVPD;
一增加了RT-PCR检测方法
本标准的附录A、附录B和附录C均为资料性附录
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归ロ
本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、扬州大学。
本标准主要起草人:刘华雷、吴艳涛、王志亮、刘文博、马洪超、刘秀梵
夲标准所代替标准的历次版本发布情况为:
GB16550-1996。
GB/T16550-2008
新城疫诊断技术
1.范围
本标准规定了新城疫的床诊断、病毒分离与鉴定、血凝试验、血凝抑制试验、反转录聚合晦链式反
应(RT-PCR〕和综合判定。
本标准适用于新城疫的诊断。
2缩略语
下列缩略语适用于本标准。
DEPC一焦碳酸二乙酯;
HA一血凝;
AU一血凝单位,以完全凝集病毒的血滑最高稀释倍数为ー个血凝单位;
HI血凝抑制
ICPI一脑内接种致病指数;
IVPI一静脉接种致病指数;
MDT一致死鸡胚平均死亡时间;
NDV一新城疫病毒;
无特定病原体
临床诊断
临床症状
当禽出现以下部分或全部情形时;可作为初步诊断的依据之
a)发病急,死亡率高
b)体温升高,极度精神沉郤,呼吸圈难,食欲下降
c)粪便稀薄,呈黄绿色或黄白色;
d)出现扭颈、翅膀麻痹等神经症状;
e)免疫禽群出现产蛋下降
3.2病理变化
当禽出现下列肉眼可见的病变时,可作为初步诊断定性的依据之
a)全身點膜和浆膜出血,以呼吸道和消化道最为严重;
腺胃豺膜水肿,乳头和乳头间有出血点
c)盲肠扁桃体肿大、出血、坏死;
d)十二指肠和直肠黏膜出血,有的可见纤维素性坏死病变
脑膜充血和出血,鼻道、喉、气管黏膜充血、偶有出血,肺可见淤血和永肿
当禽出现上述病变时,应进行实验室确诊.
4病毒分离与鉴定
4.1病毒分离
4.1.1品采集
从活禽采集的禅品应包括气管和泄殖腔拭子;后者需带有可见粪便,对锥禽采集拭子容易造成损
1
GB/T16550-2008
伤,可采用收集新鲜粪便代替。死禽以脑、肺腔、脾脏为主,也可采集其他病变组织
4.1.2祥品处理
样品置于含抗生素的等渗磷酸諡缓神液(PBS)(pH值7.0~7.4),抗生素视条件而定,但组织和气
管拭子保存液中应含青霉素(2000U/mL)、链霉素(2mg/mL.)、卡那霉素(50Hg/mL)和制菌霉素
(1000U/mL),而羹便和泄殖腔拭子保存液抗生素浓度应提高五倍。加入抗生素后调pH值到7.0
7,4。羚便和搅碎的组织,应用含抗生素的PBS溶液制成10%(g/mL)~20%(g/rmL)的悬浮液,在室温
下静置1h~2h。将粪便或组织的悬浮液在4℃下以3000g离心5min,取上清液进行鸡胚接种。
4.1.3鸡胚接种
用1mL注射器吸取上清液按每枚缸,经尿囊腔接种少五枚9日龄~1日除的SPF鸡胚,
接种后,35℃~37℃卿育4d~7d18h后每8h观察鸡胚死亡情
4.1.4病毒收获
13以后死亡的和额列ダ舞化时存活的鸡胚置4こ冰質4h,无采集尿液
4.2病毒鉴定
4.2.1血凝试验
对于血凝试验呈性羊品采
下血诞判制试·如果没有血凝活
性或血凝效价很低,形SPF鸡.
若仍明性认为新城疫病轟
分离阴性。方法同常G
4.2.2血凝抑制试验
采用新城疫忖血清进行
病毒繁殖。防法第6章。
4.3致病指数测起2
经确定存在病毒繁殖的,短粮据下列指标之行峰力判定
a)病毒致列到死鸡胚平均選邮AT)的测定罗
1)将髴邵感染尿囊液畑紧的
10-6-~10°;
2)》每个晞释经尿囊腔
9日龄一10日鸿还,每故鸡胚种0.1mL,置于
3)余下番释液子保
种另外枚鸡还,每枚鸡胚接种
0.1
4)每日照蛋两)连续
5)最小致死是能引趄所有用此稀释度接种的鸡胚死亡的大稀降度;
6)MDT是指般少量引起所有鸡胚死亡的平均时间(h)计算法见式(1)
Mb。Nx×x×xY
T
式中
NxX小时死亡的
Ny-Y小时死亡的胚数
X,Y胚死亡时间,单位为小时(h);
一死亡的总胚数
b)接种致病指数(ICPD测定:
)HA滴度高于4log2(大于1/16)以上新鲜感染尿囊液(不超过24h~48h,細薗检验为阴
性),用无菌等滲盐水作10倍稀释
2)脑内接种出壳24h-~40h之间的SPF维鸡,共接种10只,每只接种0.05mL
3)每24h观察一次,共观察8
4)每天观察应给鸡打分,正常鸡记作0,病鸡记作1,死鸡记作2,(每只死鸡在其死后的每目