SNT 1109-2002 新城疫微量红细胞凝集抑制试验操作规程.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1109-2002
新城疫微量红细胞凝集抑制
试验操作规程
Procedure of haemagglutination-inhibition test
for Newcastle disease
2002-05-20发布
2002-11-01实施
面家质量监检验检总周发布
SN/T109~-2002
前
言
本标准等效采用国际兽医局的标准《诊断方法和疫苗标准手册》(2000年,第四版),并参考中华人
民共和国进出境动物检疫规程手册编写、制定。
本标准的附录A、附录B为标准的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
本标准起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局
本标准主要起草人:胡永强、单松华。
本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
新城疫微量红细胞凝集抑制
SN/T1109-2002
试验操作规程
Procedure of haemagglutination-inhibition test
for Newcastie disease
1范围
本标准规定了禽类新城疫微量红细胞凝集抑制试验方法。
本标准适用于禽类新城疫红细胞凝集抑制抗体水平的检测
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均
为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
国际兽疫局《诊断方法和疫苗标准手册》(2000年,第四版)
3仪器设备、试剂和材料
所有试剂均为分析纯
3.1器材
普通天平、分析天平、普通离心机、V型血凝板、微型振荡器、50L可调移液器、恒温箱、塱料采血
管等
3.2试剂
磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、柠檬酸鈉、蒸馏水
3.3稀释液
pH7.0或至pH7,40.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)的配制(见附录A标准的附录)
3.4新城疫标准抗原
由指定单位供应,或用标准新城疫(ND)毒株尿囊腔接种9~11日岭无特定病原体(SPF)鸡胚,收
集尿囊液灭活制备抗原。
3.51%鸡红细胞
采集SPF鸡或无新城疫血凝抑制抗体的成年鸡血,放人等量的阿氏液(见附录B标准的附录)
用20倍体积的PBS洗涤3~4次,每次以2000r/min离心3~4min,最后一次5min,用PBS配成1%
悬液。4℃保存悬液,在72h内使用完
3.6血清
3.6.1标准阳性/阴性血清:由指定单位供应
3.6-2被检血清:采、送的样品
样品以1000r/min离心5min,吸出血清待用。若需较长时间保存血清,可登于4℃或一20℃。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-05-20批准
2002-11-01实施
SN/T1109-2002
4操作方法
4.1徽量血凝试验(见表1)
表1微量血凝试验操作术式
单位:gL
孔号
7
滴虔(log2)
4
6
1011对照
PBS
25
25
25
抗原《倍比稀释
2
25
25
25
1%鸡红细胞
2525
25
25
25
25
作用时间及温度
18℃~20て,静置40min左右
判定举例
+++++++++++++キ+++++十+++1++キ+キキキ「+
4.1.1在微量血凝板上,自第1列孔至第12列孔,每孔加25LPBS,共加四排
4.1.2吸取一定倍数稀释的抗原25L加于第1列孔,充分混合后移出25L至第2列孔,依次类推
做等量倍比稀释至第11列孔,第11列孔弃去25以L。
4.1.3设立第12列孔为红细胞对照。
4.1.4每孔再加25LPBS。
4,1.5每孔各加入1%鸡红细胞悬液25gL。
4.1.6立即置微型振荡器上混合1min,或手持血凝板绕圆混匀。
4.1.7登37℃静置15min~20min,或室温(18℃~25℃)静置40min左右,或4℃静置60min(如果
环境温度太高时)。
4.1.8结果判定:期间观察数次,直至对照的红细胞全部沉淀(此时为一个圆点〉。将血凝板倾斜,观察
红细胞有无洎珠样流桂,根据血凝图像判定结果。HA效价高于2时可继续增加稀释的孔数
以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度《红细胞无泪珠样流挂),该血凝滴度代表
了一个血凝单位,再根据初始稀释度计算抗原的血凝单位。
4.1.94个血凝单位的标定:根据4.1,8测定的抗原的血凝效价,计算4个血凝单位抗原的稀释倍数。
方法举例为:如抗原HA效价为27,其4个单位抗原HA效价为2,则将抗原稀释32倍即可。
将25L含4个血凝单位的抗原用PBS做等量倍比稀释,使每孔(25L)含有4、2、1、0.5个血凝单
位,再加入1%鸡红细胞25pL,判定血凝图像与预期结果是否相符合。4、2、1个血凝单位孔红细胞应出
现完全凝集,0,5个血凝单位孔红细胞应出现50%凝集。若不相符,须按4.1.1~4.1.8法重新进行
4.2微血凝抑制试验(见表2)
表2徴量血凝抑制试验操作术式
单位:L
10
滴度(og2)
6
7
9
10
12
PBS
25
25112511252525
被检血落倍比稀释」25」2525)285」2525125252523235月25
4血凝单位抗原
25
25125
25
作用时间及温度
18℃~25℃:30tmin~60min
1%鸡红细胞悬液252525
25
25
252525252525
作用时间及温度
18℃~25℃,静置40min左右
判定举
++++「++++は++ャ++++