DB21∕T 2468-2015 新城疫免疫抗体监测技术规范.pdf

ICS11.220
B 4
1DB21
辽宁省地方标准
DB21/T2468-2015
新城疫免疫抗体监测技术规范
Technical specification for monitoring immune antibody of Newcastle disease
2015-04-30发布
2015-06-30实施
辽宁省质量技术监督局发布
DB21/T2468-2015
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出
木标准山辽宁省畜牧兽医局归口。
本标准起草单位:辽守省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。
本标准主要起草人:王宏燕、赵晓、薛树山、闫海滨、马建山、石霖、李清竹、吴运谱、何欣、
王志国、赵鹏、李晓楠。
DB21/T2468-2015
新城疫免疫抗体监测技术规范
范围
本标准规定了新城疫免疫抗体隘测技术中的样品采集和制各、血凝试验、血凝抑制试验的操作规程
利和综合判定。
本标准适用于新城疫疫苗兔疫抗体监测。
2规范性引用文件
下列文件对于木文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注目期的引用文件,其最新版木(包括所有的修改单)适用于木文件
GB/T16550-2008新城疫诊断技术
3缩略语
下列缩略语适用于本标准。
HA:血凝( hcmagg lumination)
INE:血凝单位.( hemagglutination unit)
H:血凝抑制( hemagg lumination inhibition)
4器材与试剂
4.1器材:普通天平、分析天平、普通离心机、微型振荡器、冰箱、高压灭菌器、微量移液器、滴头、
96孔90度V形血凝反应板
4.2阿氏液( 1lsever' s Solution):配制方法参见附录A中A.1。
4.3pH7.20.01mol/L僯酸盐缓冲液(PS):配制方法参见附录A中A.2。
4.41%鸡红细地悬液:配制方法参见附录A中A.
4.5标准新城疫病毒抗原、阳性刈照血清和阴性?照血清
5抽样样本量大小的确定
5.1无限群抽样样本量n值的计算
按照预期新城疫免疫抗体合格率为70%,可接受的最大绝对误差为5%,置信水平为95%,根据公式
n=p(1-p)×z/e计算Hn値,其中と值为95%置信水平对应的标准正态分布1-a/2百分位点,为1.96,将
p=0.7、7=1.96、e=0.05计算出n值为323
5.2有限群抽样样本量n。值的计算
根据公式n。=×N/(N+n),计算出群体实际抽样数量,其中N为群体数量,n。为抽样数量
DB21/T2468-2015
6样品采集和制备
血液采集
将鸡侧卧保定后,用酒精棉球消毒翅静脉窩区,在距离翅静脉窝约0.3cm处,使针管与近心端保持
45度进针,稍稍将针头轻插进血管,轻拉活塞,当有血液开始被吸出后,保持注射器位置不动,让血液
缓缓吸入注射器针管内,达到所需的采血量后,用棉球压迫血管上的伤口约30s。
6.2血清分离
采集到血液后,立即将针头拔掉,把注射器内的血液沿着试管壁徐徐注入,不能有气泡,也不能振
荡。逐一编号,仔细核对,倾斜放置。血液样品夏天在常温下、冬天在25℃~37℃温箱中放置1h左右,
析出血清。
6.3血清运输
运输时将血清与采样记录一同装入隔热坚固、内装适当冷冻剂和防震材料的专用运输容器中。外包
装上要加贴生物安全警示标志
6.4血清保存
血清保存在-20℃~-70℃低温冰箱中,避免反复冻融
7HA试验方法
7.1取新城疫病毒抗原1瓶,加入2m.IPBS,充分溶解,制成新城疫病毒抗原悬液。
7.2取孔面规整、内壁光滑的96孔90度V型血凝反应板,在A1~C12孔中加入0.025ml.PBS。
7.3吸取0.025mL新城疫病毒抗原悬液,加入AI~C1孔,吹打3~5次充分混匀。
7.4从AI~C1孔吸取0.025mL加入第A2~C2孔,混匀后吸取0.025mL加入A3~C3孔,依次进行倍
比稀释至AIl~CIl孔,最后从Il~Cl1孔吸収0.025mL弃去
7.5AI~C12孔补加0.025 ML PBS。
7.6AI~C12孔加入1%鸡红细胞悬液,A12~C12孔为红细胞对照。
7.7振荡混匀后,在20℃~25℃的条件下静置40min后观察结果。
7.8当红细胞对照孔A12~C12孔中的红细胞呈叨显的扣状沉到孔底时,判定结果。以完仝凝集红细
胞的病毒抗原悬液的最大稀释倍数为该抗原的血凝滴度。完全凝集红细胞的病毒抗原悬液的最大稀释倍
数为1个血凝单位(HAU)。
8H试验方法
8.14HAU抗原配制
按照GBT16550-2008新城疫诊断技术的要求配制1个血凝单位(4ILU)的新域疫病毒抗原。
8.24HAU抗原回滴
8.2.1取血凝反应板,在Al~C5孔加入0.025 MIL PBS。
8.2.2吸取0.025m.4HAU新城疫病毒抗原,加入A1~C1孔,泥匀后倍比稀释至A4~C4孔,混匀后
吸取0.025正弃去。