用LC∕MS∕MS快速检测食品中的孔雀石绿、结晶紫、隐性孔雀石绿、隐性结晶紫.pdf

ANALYSIS&TEST分析与检測
〔试验与方法】
用LC/MS/MS快速检測食品中的
孔雀石绿、结晶紫、
隐性孔雀石绿、隐性结晶紫
口赵亮TV葉苗公罰
孔雀石绿(MG)和结晶紫(CV)为材料与方法
取混合标准溶液母液0.1mL于10mL容量
三苯甲烷类染料.因价格低廉.使用方1.试荆与位器
瓶中,然后定容.
便,常用于鱼类水磊病等寄生虫病的防
孔雀石绿标准品:Dr.E公司,纯度
治或作为消毒剂用于鲜活鱼类运输过~98%:隐性孔雀石绿标准品:Dr.E公样品制备与定
程中.以延长鱼类的存活时间.实验研司,纯度>96%:结晶紫标准品:Dr.E
称取5g已均质样品于50mL离心管
究表明,孔雀石绿或结晶紫进入人或动公司,纯度>97%:隐性结晶紫标准中.加入0.01ug/mL的内标工作液,3克
物机体后,可以通过生物转化,还原代品:Dr.E公司,纯度>98%.D5一孔雀酸性氧化铝粉末和50mL乙腈.用均质机
谢成脂溶性的无色孔雀石绿(LMG.也石绿标准品内标物质,D6一隐性孔雀以1000 r/ming的速度均质405,充分振
叫隐性孔雀石绿)或无色结晶紫(LCV.石绿标准品内标物质.UPLC-TOD液摇,再以5000r/min的速度离心5min.将
也叫隐性结晶紫)。LMG.LCV具有高毒质联用色谱仪:美国 Waters/公司,食品上清液转移至150mL离心瓶中.60C减
性,高残留和致癌.致突变等副作用.严均质器:丹麦Foss公司,HB10型旋转压旋转蒸发至干,用2mL50%乙腈水溶
重威胁着消费者的身体健康.鉴于孔雀蒸发仪:KA公司,BP211D型电子分析液漩涡洗脱,取上清液,用0.25um微孔
石绿及结晶紫的危害性,目前许多国家天平:德国赛多利斯公司,可调微量加漶膜过漶,滤液待测
和地区都作了“在鱼类及肉制品中不得样器系列: Thermo Labsystems公司,
取待测溶液10L进样测定,根据每种
检出孔雀石绿、结晶紫以及隐性孔雀石酸性氧化铝粉末:广州天河精科化玻物质的相对保留时间和定性鉴别离子与定
绿、隐性结晶紫”的规定,本研究尝试仪器公司
量离子的比值进行定性鉴别,测定每种物
采用C/MS/MS方法,检测虾类及肉中2.标准溶液的配制
质特征定量离子和内标物定量离子的峰面
孔雀石绿、结晶紫、隐性孔雀石绿、隐性
200μg/mlL标准溶液母液:分别称积,计算两者的峰面积比值,与标准曲线
结晶紫的含量
取孔雀石绿《MG)、结晶紫(CV)、隐性进行比较,从而得到孔雀石绿、结晶紫、隐
孔雀石绿(LMG).隐性结晶紫(LCV)各性孔雀石绿,隐性结晶紫的含量,
10mg,于50mL容量瓶中.然后定容
亵1流动相梯度
1pg/mL混合标准洺液母液:分别时间(mi?流速(mu/min) A%6%
量取孔雀石绿.结晶紫、隐性孔雀石绿
0.4
隐性结晶紫、标准溶液母液各250uL于
3.0
50mL容量瓶中,然后定容.
4
0.4
0.01ug/mL混合标准工作溶液:量
5.0
0.4
32+为
2010年B月刊
器条件
1.UPLC操作条件
采用的色谱柱为 JPLC BEH
C18 column:流动相A为5mmol/L
乙酸胺溶液,流动相B为乙腈,流动
相梯度见表1
2.TOD捡测器条件
毛细管电压:3.2kV,锥孔电压:
32V.离子源温度:120C.去溶剂气体
温度:350℃,萃取锥孔电压:3.00V
碰撞气体流速:0.15mL/min,RF电
压:0.3V
结果与分析
1用2.5mml甲酸铵:乙腑作流动相的MG,V、LMG,LCV分离效呆
本研究以海南产对虾和超市中的
鸡肉为对象,进行添加验证实验,加标过查阅一些文献,笔者了解到,为防止可带正电荷,本试验分别尝试了以醋酸
量分别为0.5pb.1.0ppb和2.0ppb.每孔雀石绿与结晶紫氧化并提高提取效铵:乙腈以及甲酸胺:乙腈作为流动相
个加标量平行做六个重复,所得结果率,有人在提取过程中加入对甲苯磺酸结果发现,2.5mol甲酸铵:乙腈作为流
见表2。由表2可以看出,在3个添加浓与盐酸羟胺.本实验发现.加入盐酸羟动相的结果响应值较高且分离效果较
度下,孔雀石绿、结晶紫.隐性孔雀石胺与对甲苯磺酸,并没有使提取效率得好(见图1).孔雀石绿.隐性孔雀石绿
绿隐性结晶紫的回收率均达到了81%到明显提升:在提取过程中加入酸性氧结晶紫、隐性结晶紫的保留时间分别为
以上,RSD除结晶紫外均在15%以内,化铝粉未则不但可以吸收样品中的水1.74min.2.5imin,1.93min.2.4min
结果比较理想
分.还可以去除样品中的脂类物质;添
孔雀石绿.结晶紫.隐性孔雀石绿、加无水硫酸钠粉末会影响孔雀石绿、结试验结论
隐性结晶紫不稳定,在常温下很容易降晶紫的提取效率,效果不理想。
通过实验,建立了用UPLC/MS/
解.所以本实验采用了内标法,大大提
此外,由于孔雀石绿,隐性孔雀石MS检测食品中孔雀石绿(MG)、结晶
高了标准曲线的线性相关性,另外,通绿,结晶紫、隐性结晶紫在酸性条件下紫(CV).隐性孔雀石绿(LMG).隐性结
晶紫(LCV)的方法:乙腈提取样品,酸
表2MG、CV、LMG、LCV回收平及RSD
回收率(9%)「RSD(%
性氧化铝除杂,正己烷脱脂后进行测
名称
浓度pb)
LOQ(ppb)
93.7
试,孔雀石绿(MG)、结晶紫{CV),隐
0.5
孔雀石绿
92.1
11.9
0.5
性孔雀石绿(LMG)、隐性结晶紫(LCV
03.9
4.0
四种物质的检出限均可达到0.5ppb
在0.5~2.0pb的添加范围内.线性范
隐性孔雀石绿
97.5
2.5
0.5
99.0
3.4
围r2>0.99,添加回收率在81~103%
6.8
之间,结果较为理想
结晶紫
22.9
0.5
此外,试验还发现,与普通的HPLC/
MS/MS相比,UPLC/MS/MS能够大大
隐性结晶紫
6.2
0.5
缩短检测所用时间(整个分析过程仅需
2.0
03.0
10.5
5min),分析效果也得到了明显提高,
万方数据
2010 CHINA FOOD SAFETY