MI琼脂法同时检测环境水样中总大肠菌群和大肠埃希氏菌.pdf

2013年10月
岩矿测试
October 2013
ROCK AND MINERAL ANALYSIS
747~752
文章编号:0254-5357(2013)05-0747-06
MI琼脂法同时检测环境水样中总大肠菌群和大肠埃希氏菌
嵇志远,王维玮2,文扬
(1.杭州市水务控股集团有限公司水质监测中心,浙江杭州310014;
2.中央民族大学生命与环境科学学院,北京100081;3.中国人民大学环境学院,北京100872)
摘要;总大肠菌群和大肠埃希氏菌是表征环境水样中类便污染的两个重要指
标。对这两个指标的检测,传统的多管发酵法和潓膜法已经无法满足快速、
准确的检测要求。而近年来能够快速测定的固定酶底物技术(DST)已经在
国内开始运用,但是由于其检测成本较高,影响了其在基层实验室的推
MI琼脂法的出现较好地弥补了这个缺陷。本文应用M琼脂法检测測环境水
样中总大肠菌群和大肠埃希氏菌,对共方法性能进行了测试和研究,选择国
家标准方法一远藤黥脂法作为比较对象,通过茵种加标回收试验比较MI
琼脂法和远藤琼脂法的灵敏度差异,通过实际水样的检测验证MI琼脂法和
国标法是否具有等效性。结果表明:使用MI琼脂法检测总大肠菌群和大肠
埃希氏菌加标样品的平均回收率分别为89.2%和88.8%,分别高于远藤琼
脂法的81.0%和81.2%,证明MI琼脂法的灵敏度高于远藤琼脂法。MI琼脂法和远藤琼脂法检测总大肠菌
群和大肠埃希氏菌的相关系数分别为0.9627和0.9511,都具有显著相关性,且检测结果没有统计学意义上
的差异,证明两种方法检测总大肠菌群和大肠埃希氏菌具有等效性。与国家标准方法相比,MI琼脂法具有
灵敏度高、操作简便、检测周期短、检测成本低、可同时检浏两个指标等优点,可以替代传统的滤膜法作为检
测总大肠茵群和大肠埃希氏菌的新方法
关键词:环境水样;总大肠菌群;大肠埃希氏菌;M琼脂法;远藤琼脂法
中图分类号:X171.5;Q939.1
文献标识码:A
总大肠菌群( Total Coliform)和大肠埃希氏菌析方法》第四版只收录了多管发酵法和滤膜法,
( Escherichia coli)是指示水体中粪便污染的最重要目前已经十分落后;而2006版《生活饮用水标准检
的两个细菌学指标。总大肠菌群主要由以下4个菌验方法》虽然新増了能够快速测定的固定酶底物法
属细菌组成:埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌属( Defined Substrate Technology),但是由于配套耗材
和肠杆菌属。与人类生活密切相关的仅有一个种,成本较高,在基层检测实验室的推广有一定难
即大肠埃希氏菌,而柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠杆度?。目前国内大部分日常检测还是使用原有的
菌属所占数量较少。这些菌属可以在人和畜的於使国标方法一远藤琼脂法,这是一种以远藤琼脂作
中检出,也可以在营养丰富的水体中检出,即在非粪为主要培养介质的滤膜法,其最大的缺点是检测周
便污染的情况下,也有检出这些细菌的可能性。作期长,操作繁琐,方法的干扰因素多,方法性能不是
为粪便污染的指示菌,大肠埃希氏菌检出的意义最十分理想。M∏琼脂法的出现使解决这些问题成为
大,总大肠菌群的检出意义略差一些。因此,对可能,该法已经得到美国国家环保署(EPA)的认可
般的环境水样可先检测总大肠菌群的存在与否,是EPA检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的首
再进而根据需要检测大肠埃希氏菌。对这两个指标选方法4。
的检测,国内的主要水质标准,如《水和废水监测分
酹底物技术( Enzyme Substrate Technique)是
收稿日期:2013-04-23;接受日期:2013-05-20
作者简介:磁志远,工程师,从事水质检測工作。E-mail:95593344q,com
第5期
岩矿测试
20]3年
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种可以快速评价水中总大肠菌群或大肠埃希氏菌的为(30±3)CFU/100mL,用于总大肠菌群回收率
检测技术。该检測技术利用了目标菌群在选择性培试验。
养基上产生特异性的酶类物质,进而分解可以起到
Bioball大肠埃希氏菌( Escherichia coli)定量质
指示作用的底物来达到检测目的的。此类选择性控菌株:生物梅里埃公司,菌含量为(30±3)CFU/
培养基亦被称为显色培养基( Chromogenic,/100mI,用于大肠埃希氏菌回收率试验。
Fluorogenic Culture Media)。显色培养基结合了酶
其他材料:醋酸纤维素酯滤膜(0.45um孔
与底物反应的特异性和菌落颜色的可视化信息,可径),革兰氏染色试剂盒,生理盐水等
以在自然环境中检测和鉴定不同的微生物个体,尤1.3两种檢测方法实验步骤
其是对混合生长的多种微生物进行检测,因此被广1.3.1MI琼脂法
泛应用于不同微生物群落结构检測和评价,是微生
使用经过灭菌处理的徴孔滤膜(孔径为0.45
物快速检测方法中的研究热点?
um)过滤100mL水样,细菌被截留在滤膜上,将滤
目前,能较好地应用于水中总大肠菌群和大肠膜贴在MI琼脂培养基上,35℃培养24h后,在365
埃希氏菌检测的显色培养基主要有mTEC琼脂和mn紫外光下产生白色荧光的菌落为总大肠菌群,在
MI琼脂两种。其中mTEC琼脂法只能检测大肠埃常光下显蓝色的菌落为大肠埃希氏菌,未产生荧光
希氏菌单个指标,而MI琼脂法能同时检湖总大肠的蓝色菌落一并计入总大肠菌群,最终结果用
菌群和大肠埃希氏菌炳个指标,显然具有更好的工CFU/100mL表达?。
效”。MI琼脂是一种含有 MUGAL(4-甲基伞形1.3.2远藤琼脂法
酮-β-D-吡喃半乳糖苷)和IBDG(吲哚基-B
实验步骤参照《生活饮用水标准检验方法》总大
Dー-葡萄糖苷酸)两种底物的显色培养基。总大肠肠菌群和大肠埃希氏菌滤膜法检测步骤。使用经
菌群和大肠埃希氏菌在MI琼脂培养基上能够分别过灭菌处理的微孔滤膜(孔径为0.-45m)过滤100
产生分解 MUGAL和IBDG这两种底物的酶类物mL水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在远藤琼脂
质-3-半乳糖苷酶和B-萄糖醛酸酶。培养基上,6℃培养24h后,计数具有金属光泽的紫
MUGAL被总大肠菌群分解后,能够在365mm紫外光红色菌落,对此类菌落进行革兰氏染色和乳糖蛋白胨
照射下产生荧光,同时,大肠埃希氏菌能够分解复发酵试验,若结果均为阳性则判定为总大肠菌群阳
IBG,在MI琼脂上产生蓝色的菌落”。
性菌落。若将远藤琼脂上培养24h的滤膜转移至
由于M‖琼脂法和远藤琼脂法的过滤操作步骤NA-MUG培养基上,再培养4h,在365nm紫外光下
相同,且结果均以CFU/100ml.表达,所以本文运用产生荧光的菌落即为大肠埃希氏菌。
MI琼脂法和国家标准方法一一远藤琼脂法同时检1.4回收率试验和地表水样品检测步骤
测环境水样中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌,从两1.4.1加标样品
种方法的灵敏度、特异性、检测结果等效性等方面进
准备20件生活饮用水样品,将 Bioball水溶性
行数据分析比较,验证MI琼脂法的技术优势,为该干粉菌株溶解于柑应体积的饮用水样中,混匀样
技术在国内的推广应用提供参考依据
品1。分别使用MI琼脂法和远藤琼脂法对加标水
样进行总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测,检测方
实