CJT 3018.15-1993 生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 多管发酵法.pdf

中华人民共和国城镇建设行业标准
生活垃圾渗沥水总大肠菌群的检测
多管发酵法
Leachate-detection for members of
the coliform group-multiple-tube
fermentation method
cJ/T3018.15-~93
主题内容与适用范?
本标准规定了用多管发酵法检测渗沥水中总大肠菌群的方法。
本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。
2引用标准
GB5750生活饮用水标准检验法总大肠菌群
GB4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定
3术语
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸
产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
总大肠菌群数系以每升渗沥水样品内,总大肠菌群的最可能数(MPN)表示。
4原理
根据总大肠茵群具有的生物特征,如革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃于乳糖内培养能
发酵,并在24h内产酸、产气的特点,将不同稀释度的试样接种到具有选择性的乳糖培养
基中,经培养后根据阳性反应结果,测出原试样中总大肠菌群的MPN值。
5培募基和试剂
本标准所用试剂,除另有说明外,均为符合国家标准或行业标准的化学纯试剂和生化
试剂,均用蒸馏水或去离予水。
1乳糖蛋白陈培养液
5.1.1成份:蛋白胨
10g
中华人民共和国建设部1993-05-03批准
1993-09-07实施
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c/T3018.15-93
牛肉膏
g
乳糖
g
氯化钠
5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
蒸馏水
1000mL
5.1.2制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠登于100omL蒸馏水中加热溶解,调整pH为7
7.4,再加入1mL1.8%溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,置高压
蒸汽灭菌器中,以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。
5.2三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液(5.1)浓缩三倍配制。
5.る品红亚硫酸钠培养基
5.3.1成份:蛋白胨
10g
乳糖
10
磷酸氢二钾
琼脂
15~30
蒸馏水
1000mL
无水亚硫酸钠
g
5%截性品红乙醇溶液
5.3.2储备培养基的制备
先将琼脂加至900mL蒸馏水,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使其溶
解。再用蒸馏水补足到100mL,调整pH为7.2~7.4,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入
乳糖,混勺后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min,贮存于冷暗
处备用。
5.3.3平板培养基的配制
将上法制备的储备培养基(5.3.2)加热融化,根据烧瓶内培养基的容量,用灭菌吸
管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液,置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无
水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解后,置于沸水浴中煮沸10min
以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡
粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基内,并充分
混勺(防止产生气泡),立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内,待其冷却凝固
后,倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存应小于两星期,如培养基已由淡
红色变成深红色,则不能再用。
5.4伊红美蓝培养基
5.4.1成份:蛋白陈
10g
乳糖
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cJ/T3018.15-93
磷酸氢二钾
2
琼脂
20~~30g
蒸馏水
1000mL
2%伊红水溶液
20ML
0.5%美蓝水溶液
13ML
5,4.2储备培养基的制备
先将琼脂加至90mL蒸馏水,加热溶解,然后加入裤酸氢二钾及蛋白陈,混匀使之溶
解,再用蒸馏水补足到100mL。调整pH为7.2~7.4,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入
乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min,贮存于冷暗
处备用。
5.4.3平板培养基的配制
将上法制备的储备培养基(5,4.2)加热融化,根据烧瓶内培养基的容量,用灭菌吸
管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液,加
入已融化的储备琼脂内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基适量倾入于已
灭菌的空平皿内,持其冷却凝固后,倒置冰箱内备用。
5.5生理盐水
将8.50~9.50g氯化钠(NaCI)溶于水中,稀释成1000mL,摇匀。pH值应为4
6仪器、设备
6.1高压蒸汽灭菌器。
6.2干燥箱:最高工作温度300℃。
6.了恒温培养箱36土1℃。
6,4冰箱。
6.5恒温水浴:46±1℃。
6.6生物显微镜。
6.7稀释瓶:125mL小口玻璃方瓶。
6.8玻璃试管:18×180nm
6.9玻璃倒管:3×30mn
6.10刻度吸管:1mL,10mL,分度至0.1mL
6.11载玻片。
.12平皿:直径90mm。
6.1る接种环:直径3mm
.14酒精灯。
7样
供总大肠菌群检测的渗沥水实验室样品量约需100mL,用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。
采样后应尽快检测,在2h内不能处理时,应置于2~5℃冷談,最长保存时间为6h