CBT 3328.1-2013 船舶污水处理排放水水质检验方法 第1部分耐热大肠菌群数检验法.pdf

ICS47.020
U04
备案号:45041-2014
中华人民共和国船舶行业标准
CB/T3328.12013
代替CB3328.1-1988
船舶污水处理排放水水质检验方法
第1部分:耐热大肠菌群数检验法
Test method for waste water quality of ship sewage treatment
Part1: Thermotolerant coliform counts
2013-12-31发布
2014-07-01实施
CIMTES
内防伪码中华人民共和国工业和信息化部发布
真品标识防仿
CB/T3328.12013
前言
本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本部分代替CB*3328.1—1988,与CB*3328.1-1988相比主要技术变化如下:
a)将“大肠杆菌”改为“耐热大肠菌群”
b)增加了规范性引用文件(见2)
c)将24h的培养温度提高至(44.5士0.5℃(见3,原标准第2章)
d)培养基灭菌的灭菌温度改为115℃,灭菌时间改为20min(见4.1.2,原标准3.7)
e)增加了EC培养液的配置方法(见4.3)
f)增加“当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用”的要求(见4.4)
本部分由全国船用机械标准化技术委员会海上环境保护分技术委员会(SAC/TC137/SC9)归口
本部分起草单位:中国船舶重工集团公司第七四研究所、南京中船绿洲机器有限公司、东台市东
方船舶装配有限公司。
本部分主要起草人:李安娜、盛伟群、张晓群、吕敬、陈海兵
本部分于1988年2月首次发布。
CB/T3328.1-2013
船舶污水处理排放水水质检验方法
第1部分:耐热大肠菌群数检验法
1范围
本部分规定了船舶生活污水处理排放水中耐热大肠菌群数检验方法的原理、培养基种类及配制、仪
器、检验手续、大肠菌群数的结果计算和精密度。
本部分适用于船舶生活污水处理排放水水质的耐热大肠菌群数检验,也可用于其他废水、河、海水
等的大肠菌群数的检验。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
HJ/T3472007水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法
3原理
耐热大肠菌群是总大肠菌群中的一部份,主要来自粪便,是在(37±0.5)℃下培养(24±2)h,产
酸和产气的,并且在提高温度至(44.5士0.5)℃下培养(24±2)h,仍能生长并发酵乳糖产酸产气
的大肠菌群。用提高培养温度的方法,造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的
菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反出水质受粪便污染的情况。多管发酵法以最可能数
(Most Probable Number,)表示试验结果,其原理见HJ/T3472007
4培养基和试剂
4.1单倍乳糖蛋白培养液
4.1.1成分
单倍乳糖蛋白胨培养液的成分见表1
表1单倍乳糖蛋白胨培养液
培养基名称
数量
蛋白胨
10g
牛肉浸膏
3g
乳糖
5g
氯化钠
5g
学兔www.bzfw.com
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表1(续
培养基名称
数量
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
1 mL
蒸馏水
1000mL
4.1.2制法
将蛋白、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中,调节PH为7.2~7.4,再加入1.6%
溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,于高压蒸汽灭菌器中,在
115℃灭菌20min,贮存于暗处备用
4.2三倍乳糖蛋白胨培养液
按4.1配方比例三倍(除蒸馏水外),配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液,制法相同。
4.3EC培养液
4.3.1成分
EC培养液的成分见表2
表2EC培养液
培养基名称
数量
胰胨
20g
乳糖
5g
胆盐三号
1.5g
磷酸氢二钾(KHPO4
4g
磷酸二氢钾(KH2PO4
1.5g
氯化钠
5g
蒸馏水
1000m
4.3.2制法
将表2规定的成分加热溶解,然后分装于含有玻璃倒管的试管中置高压蒸汽灭菌器中,在115℃
灭菌20min,灭菌后PH应为6.9
4.4培养基的存放
在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处,存放时应避免阳光直
接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用。
5仪器
耐热大肠菌群检验方法用仪器见表3
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表3检验方法用仪器
仪器名称
要求
隔水式恒温培养箱
温度在(20~50)℃
序123456789012
热空气灭菌烘箱
温度在(170±10)℃
高压蒸汽灭菌器
温度在121℃
恒温水浴锅
电冰箱
药物天平
精确至0.1g
发酵试管5支
每支155mm
酒精灯
酸度计(PH计)
精度为士0.1个单位
接种器
采样瓶
500mL小口玻璃瓶
其他细菌培养所用的材料
脱脂棉、牛皮纸、绳等
6步骤
6.1水样接种量
6.1.1将水样充分混合后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量
接种。同一种水样量要有五管
6.1.2相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、.1mL.受污染水样接种量根据污染程度接种1mL
0.1mL、0.01mL或0.1mL、0.01mL、0.001mL等。使用的水量见表4
表4接种用水量参考表
接种量
水样种类检测方法
100501010.1102101010
井水多管发酵法
加氯的处理排放水多管发酵法
××
河水、塘水多管发酵法
装置的处理排放水多管发酵法
湖水、塘水多管发酵法
×
城市原污水多管发酵法
×
生活污水原污水多管发酵法
××
×
注:若接种体积为10mL,则试管内应该装有三倍乳糖蛋白胨培养液5mL;若接种量为1m或少于1mL,则可接种于
普通浓度的乳糖蛋白陈培养液10mL中
6.2初发酵试验
将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在(37±0.5)℃下培养(24±2)h产酸
和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。
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