酶联免疫法定量检测黄曲霉毒素B1.pdf

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珻联免疫法定量检測黄曲霉毒素B1
口李中杰郭爱萍韩璐徐州録健乳品饮料有限公司
摘要:黄曲雾毒素是多种菌产生的有毒代谢物,主要是由黄曲雲和寄生曲奪产生的次生代谢产物,主要包括四种
亚型,黄曲寡毒素B1、B2、G1和G2,其中B1毒性最强。黄曲寡毒素存在于谷物、坚果、棉花将及其他食品或饲料中,在
混热地区食品和饲料中出现的机率最高,它是一种强烈的致癌物。对于乳品行业,当奶牛被养被污染黄曲雾毒素B1的
籵后,黄曲毒素Bl通过羟基化作用转化成黄曲雲毒素M,进而污染牛奶。黄曲零毒素M结构稳定,在牛奶加工过程中
甚至是巴氏消毒都无法将其去除,直至最后被人体摄入。因此大多数国家都限制食品或饲料中黄曲毒素B1的含量
关键词:黄曲雾毒素B1;酶联免瘦法:0D值(吸光值)
1检测原理
入10m1提収溶液(70%甲醇),用
按照与底物相同的添加顺序和速
酶联免妝法定最檢测黄曲霉毒素震荡器震荡混合10分钟。注:样品与度向每个微孔中添加100u1终止液
B1采用固相直接竞争性梅联免疫原理,提取试剂的比值为1:5(wA)。
8使用晦标仪在450m下读取并
相比较国家标准而言具有简单、快速、
2.4待颗粒物质沉淀后,用记录每个微孔中的D值。
重复性好的特点。微孔中包被有对黄 Wha tm an I滤纸(或等效的)过滤4标准曲线的建立
出霉毒素B1具有高亲和力的抗体。黄5-10m1提収物,收集滤液待测
标准曲线
相关系数;1.000
由霉毒素B1酶标物与标洋品或样品中3检测步骤
标派品浓度(ugml)」光值(450mn
942
的黄曲荇毒索31党争结合微孔中包被
3.1使用前将所有试剂恢复至室温。
1.37
的抗体。孵育一定时间后,倾倒微孔3.2取出相应数量的稀释孔置于微
0.5
1.050
中的内容物,洗涤非特异反应物。随孔架:(每个标准品或待测品对应
0.496
4.0
0.239
后加入底物试剂,溶液变为隘色。个稀释孔),再取出等量包被抗体的
根据标准品浓度及吸光值建立
色强度与黄曲莓声素B1酶标物的量成微孔賞丁另一个做孔架上,向每个稀个半対数坐标系統,在标准线:
正比,与样品或标准品中黄曲荇毒素释孔加入200u黄曲荇毒素31晦标物。
段范内呈线性
B1的浓度成反比。最后加入酸性终止3.3向每个稀释孔加入100n1标准
5样品的测定
液,终止反应并将微孔中溶液颜色变品或样品(每次移収均使用新枪头
样品序「样品名「吸光值「样品浓度
为黄色。使用酶标仪在450nm下检测吸打混匀,至少吸打3次
(4.50nm)
1.25
1.4.5
做孔中溶液的0D值。比较样品0D值
3.4从每个稀释孔中移取100uL混
2变ド0s
与试剂盒提供的标准品的0D偵,即可合液,转移至相应的抗体包被微孔中
1.0)30
获得检测结果。
(每次均使用新枪头),室温孵育15し4化生粕」15350.505
2.48
2样品制备
分钟。
DDGS
0.097
2.1制备提取溶液(70%甲)(以3.5孵育完成后,将微孔中内容物6结果分析
单个待测样品为单位):向7m分析纯倒入废液缸,采用蒸馏水或去离子水将样品吸光值袋代入酶标仪特定
级叩醇中加入30m!蒸馏水或去离水。洗涤微孔,共洗涤4次。然后拍打微程序,可以得出样品1、样品3、样品
2.2使用粉碎机将样品粉碎,使颗孔板,厶除残留的洗涤液
4、样品5的吸光值人」」标准品浓度
大小与速溶性良好的咖啡颗相同
根据样品和标准品个数,向每个4.0(ngm1)的吸光值,黄曲蛋毒素
(50%可通过20目筛)
微孔中添加100u1底物(显色剂
B1含量都小于20pb,合格;而样品
2.3称取20克粉悴后的样品,加室温野育5分钟。
、样品6吸光值小丁标准品浓度4
食品安全导2011年6月
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(ngm1)的吸光值,黄曲霉毒素B1释,产品中的黄曲霉毒素31的浓度应牛食用这种饲料后,所产的牛奶黄川
含量都高于20ppb,不合格。
将读収的数括乘以5(ppb)。标准品霉毒素M1势必超标。出此可见,防控
样品2、样品6样品制备后的滤液,中黄曲霉毒素B1的最高浓度为4.0ng/好华奶巾黄曲霉素M1的关健是把好
分别用70%甲崞水稀释2倍、稀释4倍、ml(ppb),对应样品巾的黄曲莓毒索饲料关,严格拧制好其巾的黄曲毒
稀释8倍后,重新进行检测,检测结B1的最高浓度为20ppb,因此,如果素31含量,显而易见黄曲霉毒素31
果如ト
样品黄曲霉毒素B1浓度高于2ppb,检测的至关重要,它能从源头杜绝牛
号释倍数/光值「样品浓度应用7%甲醇水适当稀释再检测。所奶中黄出霉毒素MI超标,保证作奶质
样品序
450nm)(pb)
得霉变玉米的实际黄曲霉毒素B1的量安全。
变土
米
0.175
0.245
19.74
浓度为:19.74×8=157.92ppb;DDGS参考文献:
的实际黄曲霉毒素B1的浓度为
[]中华人民共和国国家标准GB/
DDGS
8o3196」1916×8=1323p,种样品斗10020个中黄由毒
4
0.186
的测定
由す样品先经过7%甲水5:1稀曲霉毒素B1的含量远大于20ppb,
Jun 2015 C//A OO SAM TY