免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定月饼中的黄曲霉素.pdf

食品技术研究
免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定月饼中的黄
曲霉素
□杨国伟山西省食品药品检验所
建立了月饼中黄屾莓毒素
中黄屾莓素的测定。
小麦、豆类、坚果类,其中以化生和
B2、G1和G2的免疫亲和柱净化高效
黄曲霉素,是一和毒性极强的制毒玉米污染最严重。月饼作为我国端
液相色谱法测定方法。样品用甲醇一物质,它的危害性在于对人及动物肝节的传统食品,深受光大群众的深爱,
水提取,经免疫亲和色谱桂净化,采脏组织有破坏作用,严重时可导致肝在生产过程中所用的原料均容易被污
用液相色谱法荧光检测。试验结果癌甚至死亡。经常在玉米,化生,棉染。因此,本文采用免疫亲和柱高效
表明:空白样品分别按照1.0、2.0、花利子,一些十果中常能检测到。它液相色谱法对月併中的黄曲霉素
12.5ugkg添加黄山莓毒素,回收率们在紫外线照射下能产生残光,根据B2、G1、G2四种进行了检测。
为68.3%~98.3%,方法检出限分別为荧光颜色不同,将其分为B族和G族材料与方法
0.4、0.1、0.4、0.1ugkg。该方法灵两大类及其衍生物。会污染粮油食品、材料与试剂
敏度高,重现性好,适用于月併样品动植物食品等;如花生、玉米、大米、
Sep 2015 CHINA FOOD SAFETY
echnolo
科技
食品技术研究
甲醇为色谱级。迪马公司。
450nm;衍生条件:衍生温度:70C,
实验用水:符合一级水标准。
衍牛溶液沇速:0.3ml和in。
黄霉素(混标)T
结果与分析
Ana ly tical Laboratory 5.0 u gm I
标准工作曲线的建立
包括:黄曲霉素B12.0ug加
吸取不同浓度系列的混仚标
黄曲素12.0ug和い、黄曲等素准工.作液。按照方法仪器条件,
B20.5ロgト、黄曲霉素620.5g/注入气质联用仪,以峰面积比较
ml。各单标均为 Trilogy Analy tica l进行定量,作绘制成标准曲线
1.にrn,-6rn
Labora
黄山莓素B1、B2、B3、B4标准
图2混标溶液图
标准储备液:吸取上述混标溶液。线分别为Y64759X91340.27
1m1,加甲醇稀释成200ng血1的溶液
Y=65552.72X+583.39
备用,4C冰箱避光保存,临用前稀释
Y=30060,15X+919.10
成不同浓度的溶液。
Y=38182.27X+391.81R=1。相关系数
行牛溶液:0.05%浴液,称取0.5g均为1.0。
碘,加甲醇100m溶解,用水稀释至
表明黄山莓素B2、G2
1000m,过0.45m滤膜备用。
0.04820ng和1范国内;黄曲霉素
免疫亲和柱:黄曲霉素混合柱
G1在:0.19280ng血1范围内呈良
MT
1占玉3m,5m
(3m),北京中粉维康。
女好线性关系。
图3空白加标图
仪器与设备
精密度实验
加标回收率实验
LC-20A高效液相色谱仪带荧光检
取浓度为1ng和1的混合标准溶液
用标准加入回收实验验述方法的
测器及柱后衍生装置岛津公司
注入色谱仪器,连续进样5次,记录准确度,用平行实的精密度验证方
8P21D电子天半奥家斯仪器(に色譜图。黄曲霉素B1、B2、61、C2峰法的重复性
海)有限责任公司
面秋积RSD分別为4.3%3.7%、3.8%、3.4%
取空门月饼样品25.0g,分別加
方法
方法检出限
入200ng加1混合标准溶液0.125m1、
标准溶液及供试品溶液的备
取空白月饼样品25.0g,加入0.25m、1.6m!照样品溶液制备
月饼样品溶液制备
200g1混合标准溶液0.25m,照测定结果。黄曲霉素B1回收率为
准确称取样品25.0g,加甲:水。样晶溶液制备,上机测,黄山幕素6869687%,SD%为0.371.89%;
(70:30)溶液125m1,氯化钠5.0g,B1、B2、G1、G2=组分色谱峰响应与黄曲霉素B2回收率为70.69989%,
800rmin均质2min,过滤,取滤液基线噪音比住大于3:1,即黄山莓素RSD%为0.092.45%;黄山莓素G1
15.0m1,加水30.0m1,摇匀。用玻璃
B1、G1检出限为0.4g4g,黄曲霉回收率为80.0596.80%,RSD%为
纤维滤纸过滤2次至溶液澄清。量取素B2、G2檢出限为0.Ago
6.276.73%;黄莓素G2阿收率为
15.0m1溶液注入免疫亲和柱上,控制
r
78.0798,26%,RSD%为0.265.22%
流速为1滴/秒,全部液体通过亲和
结论
柱后,在通过3m1空气,収1m1水以
黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液
1滴/秒的速度通过亲和柱,再通过
相色谱法比传统的HPLC法更加安全可
3m1室气,用1.0m1醇洗脱,收集洗
靠,灵敏度和准确度高。它采用单克
脱液上机检测
降抗体免疫技术以特效性地将黄山
标准曲线的制备
霉毒素或其他真菌毒素分离出米,分
移取适量混仚标准储备液(200ng/
离效率和阿收率高。从以上数据可以
m1),用中醇稀释成0、0.48、1.04、5.2
1でErn-r
图1空白样品图
看出该方法檢测月併样品中黄曲霉素
10、200ng血1的标准浴液
B1、B2、G1、G2四种结果准确可靠,
HPLC色谱条件
可在实际工作运用此方法检测月併中
色谱柱:迪马针石C18250*4.6
黄莓素污染物残留量。
5um;流动相:中醇:水(45:55);
流速:1.0 m Mn in
激发波长:360nm;发射波长:
42食品安全导刊2015年9月