菠萝蜜过氧化物酶活性部位的研究.pdf

※生物工程
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2016,Wb.37No.11103
菠萝蜜过氧化勒酶湉性部位的研究
陶毅明,金荣仲,朱华,马义丽,刘青波
(桂林医学院生物技术学院,广西桂林541004)
摘要:以菠萝蜜果肉过氧化物醇( peroxidasc,POD)为研究对象,用∫二開、碳化二亚胺(NM- ethyl
N-3- dimethy aminopropyl carbodiimide,EDC)、M-乙酰咪唑(N- acetylimidazote,NAI)、-筑基乙醇
(B- mercaptoethanol,MT)、对-氯汞苯甲酸( parachloro- mercury- benzoate,pCMB)和焦碳酸二乙酯
( diethylpyrocarbonate,DEPC)对POD进行化学修饰,研究醇活性必需基团。结果表明,丁二開、EDC和NA对醇
活力无显著形响,说明精氨酸、羧基和酪氨酸与醇活力无关:PCMB、DEPC和8-琉基乙醇强烈抑制酶活性,说明
半眺氨酸和组氨酸是酶活性的必需基团,二硫键对酶活性有重要贡献。动力学分析和底物保护实验表明,DEPC为
POD的竟争性抑制,组氨酸位于酶活中心。
关键词:过氧化物酶;波萝蜜;珻活中心;必需基团;化学修饰
e Center of Peroxidase from Jackfruit Fle
TAO Yiming, JIN Rongzhong, ZHU Hua, MA Yili, LIU Qingbo
(Cohege of Biotechnology Guilin Medical University, Guilin 541004, China
Abstract: In order to investigae he essential roups for peroxidase(POD)activity from jackfruit flesh, diac tyl, N-ethyl-
N'-3-dimethylaminopropylcarbod imide(ED) N-acetylimidazole(NA), B-mercaptoethanol(M parac lor-mercun
benzoate( PCMB )and diety! pyrocarbonate (DEPC)were used to modify the POD enzyme. The esults revealed that
diacetyl, EDC and NAI showed no significant impact on POD activity, indicating that Arg, carboxyl and Lys had no
sociation with the enzyme activity. However, CMB DEPC and MT strongly inhi i e POD activty, indicating that Cys
and His were the essential groups for its activity, and disulfide bond played a very important role in the enzyme actvity
Enzymatic kinetics and substrate pro con in cae at DEPC was a mpetitive inhibitor for POD, and the Hs residu
was located at the enzyme active center
Key words: peroxidase; jackfruit enzyme activity center; essential group, chemical modification
DOI:10.7506spkx1002-6630-201611018
中图分类号:Q55
文献标志码:A
文章编号:1002-6630(2016)11-0103-05
引文格式:
陶毅明,金荣仲,朱华,等.菠萝蜜过氧化物酶活性部位的研究.食品科学,2016,37(1):103-107.DO:10.7506
spkx10026630-201611018.htt;/ww.spk.ne.cn
TAO Yi
JIN Rongzhong, ZHU Hua, et al. A
idase from jackfruit fleshujl. Food Science, 2016,
37(11):103-107.(inChinesewEnglishabstract)Dof:10.7506/spkx1002-6630-201611018.http://wwspx.ct.n
菠萝蜜( Artocarpus heterophyllus〉为桑科木菠萝属是除多酚氧化酶( polyphenol oxidase,PO)和苯丙氨酸
植物,乂称木菠萝,其果肉含丰富的糖类、蛋白质、柠解氨酶( phenylalaninammonial yase,PAL)之外,参与
檬酸和多种维生素。成熟的菠萝蜜采后一星期会发生褐褐变的重要醇类。在H102存在下,POD能催化酚类等物
变现象,影响果肉的品质和销售。
质氧化,与PPO和PAL共同作用,使果蔬发生褐变,导致
过氧化物醇( peroxidase,OD)是一种以H2O2作为果皮变色、营养散失、品质与口味不佳。
电子受体的催化底物氧化的酶。POD泛分布于植物体
有关POD催化机理和酶活中心的报道以辣根过氧化
不同的组织、器官及生长发育的不同时期,参与活性氧物酶( horseradish peroxidase,HRP)为主,研究表明
清除叫、吲哚乙酸降解、木质素合成?等生理功能,也HRP酶活中心的组氨酸通过酸碱催化等机制参加反应?
收稿日期:2015-07-24
基金项月:国家自然科学基金地区科学基金项目(31260214
作者简介:陶毅明(1981-),男,副教授,博士,主要从事生物化学与酶学研究。E-mail:yiming_tao@yahoo.com
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