SNT 1059.3-2002 进出口食品平板菌落计数 滤膜法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1059.3--2002
进出口食品平板菌落计数滤膜法
Plate count for bacterial colonies
in food for import
and export-membrane filter method
2002-01-16发布
2002-06-01实施
中华
民共和国
国家质量嗌督检验检疫总局发
SN/T1059.3-2002
前
言
本标准是按照GB/T1.1--1993《标准化工作导则第1单元;标准的起草与表述规则第1部分
标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计数滤膜法中的培养基、培养温度和膜法等内容
是参考美国公职分析化学家协会(AOAC)《公定分析方法》(1995年第16版17.2.05),结合SN0168
1992《出口食品平板菌落计数》样品制备中内容,并在实验的基础上编写而成
本标准的附录A是标准的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准由中华人民共和国天津出人境检验检疫局鱼责起草。
本标准主要起草人:陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。
本标准首次发布
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
进出口食品平板菌落计数滤膜法
SN/T1059.3-2002
Plate count for bacterial colonies in food for import
and export-membrane filter metho
1范?
本标准规定了进出口食品中平板菌落计媺膜法。
本标准仅适用于进出口方便面、化食品、矿泉水、单品糖、料、辣椒粒、牛奶(需用胰蛋白酶处理)
中薗落计数的檢验。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标雅中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均
为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
SN0330-1994出国食品中徽生物学验则
3抽样
按SN0330规定执行。
4检验方法
4.1方法原理
将滤膜放入滤器,过滤样品,使细菡在膜表。将滤膜放在化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)培养基
上培养,产生深、浅绿色菌落,进行计歜
4.2设备和材料
4-2.1滤器:一套,备有预滤器。
4.2.2真空泵
4.2.3滤膜;有机或水相,孔径为0.45Hn。
4.2.4培养箱:36C士1C。
4.2.5水浴箱:35C士1C。
4.2.6吸管:1mL、10mL,具刻度
4.2.7玻璃三角瓶和广口瓶:200nI,500ml
4.2.8试管:17mm×170mm,玻璃制。
4.2.9玻璃珠:直径5mm。
4.2.10平皿:直径90mm。
4.2.11天平:感量0.1g。
4.2.12均质器。
4.3培养基和试剂
4.3.1蛋白胨-吐温80(PT)稀释液(见附录AA1)
中华人民共和国国家质量监督检验捡疫总局2002-01-16批准
2002-06-01实施
SN/T1059.3--2002
4.3.2胰化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA)(见附录AA2)
4.3.3三(羟甲基)胺甲烷Tris缓冲剂(见附录AA3)。
4.3.4胰蛋白酶贮存液(见附录AA4)
4.4样品制备
4.4.1以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后
取样。
4.4.2样品匀液制备
4.4.2.1固体或半固体盒品:以无菌操作取25g样品,放入装有225mLPT稀释液的灭均质杯内,
于8000r/min,均质1min~2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时闾超过2min,应在均质杯外
加冰水冷却。
4.4.2.2干燥或干粉食品:以无菌操作取25g样品,放入装有225mLPT稀释液的500mL灭菌广口
瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)。迅速振摇,将样品混匀,制成1:10的样品匀液。摇时,幅度
30cm,7s内振摇25次,也可用机被振荡器振荡15s代替手摇。
4.4.2.3液体食品:用灭蓝吸管吸取25mL样品,放入装有225mL-PT稀释液的500mL的灭菌广口
瓶中,按4,4.2.2条中所述的方法,迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插人液面下不
要超过2.5cm。吸管内液体要在2s~4s内完全排入稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管
4.4.3稀释样品勺液
4.4.3.1用10mL.灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10mlL.放人装有90mLPT稀释液的200mL
灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法,迅速振摇?制成11100的样品液。
4.4.3.2分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品
液如10-3、10-4、10-6……
4.4.4醇处理的食品
需要酶处理的食品取1:10PT样品匀液10mlL加酶原液1mL,在灭菌试管中混合放人35C
士1C.水浴中处理20min~30min,取出过滤。
4.5过痣
对每一份试样,选用适宜的三个连续稀释度的样液,每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过
潓装置连接于真空抽潓瓶上,以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上,用不锈钢夹子固定。以无薗操作
加10mlL~20nL无菌蒸馏水于滤器中,加人PT样品匀液10mL,打开真空泵,抽吸过滤,再加入
10mL~15mL无菌蒸馏水,抽吸过滤,关网真空泵。用无菌镊子将滤膜取出。
4.6培养
以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上,魅膜和琼脂表面之间应无气泡
将TSFA琼脂平板,平放人36℃士1℃培养箱内培养48h。
4.7计数
4.7.1培养后,对每个TSFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌落进行计数。25~250个密落为合适范
围。如果不能立即计数,应将平板存放于0C~4C,但不得超过24h。
4.7.2如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内,先计算两个平板的平均值,再将平均偵
乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)g(mL)〕样品中平板菌数。
4.7.3如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平
均偵,然后计算每克(毫升)〔g(mL)〕样品中平板菌落数。
4.7.4当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数。计
算两个平板上的平均菡落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板薗落数。给这个数注上星号
く来),表明该数系从菌落数在25~250这一范围之外的平板估计所得
4.7.5当所有平板上的菌落都超过250时、则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍