SN∕T 3466-2013 出口食品平板菌落计数 滤膜法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T3466-2013
代替SN/T1059.3~2002
出口食品平板菌落计数滤膜法
Plate count for bacterial colonies in food for export-membrane filter method
2013-03-01发布
2013-09-16实施
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局发布
SN/T3466-2013
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN/T1059.3-2002《进出口食品平板菌落计数滤膜法》。
本标准与SN/T1059.3-2002相比,除编辑性修改外,主要技术性变化如下:
将标准名称修改为“出口食品平板菌落计数滤膜法”。
一将范围修改为:“本标准适用于矿泉水、纯净水、单晶糖、饮料、牛奶、葡萄酒及保健饮品中菌落
计数的检验
将“2引用标准”修改为“2规范性引用文件”,并对其下文进行了修改。
去掉原标准“3抽样”内容
增加了3.13pH计或pH比色管或精密pH试纸。
增加5.2检测程序。
对菌落计数的计算方法及结果与报告进行了修改
将原标准“附录A(标准的附录)”修订为“附录A(规范性附录)”,并对其内容进行文字和格式
的修改
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标崔由再家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局
本标准主要起草人:赵良娟、刘培、曲鹏、赵宏、侯丽萍、张宏伟、张霞、张海滨、高旗利。
本标准所代替标准的历次版傘发布情况为
SN/T0159.3-232
SN/T3466-2013
出口食品平板菌落计数滤膜法
范围
本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。
本标准适用于出口矿泉水、纯浄水、单晶糖、饮料、葡萄酒、牛奶等食品及保健饮品中菌落计数的
检验
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注口期的版本用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包插所有的修改单适用于本文件。
SN0330出口食品中微生物俭验通则
3设备和材料
滤器:一套,备有预滤器。
2真空泵
3.3滤膜:有机或水相,孔径为0.45Pm
3.4恒温培养箱:36℃土1℃。
3.5恒温水浴箱:35℃士1C。
3.6吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10m(具0.1mL刘度)戒微量移液器及吸头
3.7玻璃三角瓶和广口瓶:200mL.,500ml
3.8试管:17mm×170m,玻璃制
3.9玻璃珠:直径5mm。
3.10平皿:直径90mm
3.11天平:量程2kg,感量0.1g
3.12均质器
3.13pH计或pH比色管或精密pH试纸
4培养基和试剂
4.1蛋白陈-吐温80(PT)稀释液:见附录A中A.1。
4.2胰化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA):见附录A中A.2。
4.3三.(羟甲基)胺甲烷Tris缓冲剂:见附录A中A.3
4.4胰蛋白酶贮存液:见附录A中A.4。
5检验方法
方法提要
定数量的样液通过滤膜时,细菌被截留在滤膜表面,将滤膜置于胰化大豆坚牢録琼脂(TSF.A)培
ww.bzxw.com
SN/T3466-2013
养基上培养后,可产生深、浅绿色菌落,对菌落进行计数,从而测得样品屮的菌落总数
5.2检验程序
膜法的检验程序见图1。
检样
5gml.)样品+225mLPI稀释液,均质
10倍系列稀禄液的懰备
选2个~3个适宜度的样品匀液
分别取10mL抽吸过滤
滤膜置于TSFA琼脂平板表面
36C±1C培养48h
落计数
报告
图1膜法的检验程序
6检测步骤
6.1样品的稀释
6,1.1固体或半固体食品,以无菌操作称取25g样品,放入装有225mLPT稀释液的灭菌均质杯内
8000r/min均质1mnin~2min,或放入装有225mLP稀释液的尤菌均质袋中,用拍击式均质器拍
1min~2min,制成1:10的样品匀液
6.1.2液体食品,以灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225 ML PT稀释液的500mL灭菌广口瓶
中,迅速振摇,充分混匀,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。败
管内液体要在2s~4s内完全排人稀释液中,不要在稀释液中吹洗吸管
6.1.3用10mL灭菌吸管或微量移液器准确吸取1:10的样品匀液10mL,缓慢注入装有90mLPT
稀释液的灭菌广口瓶中,迅速振摇,充分混匀,制成1:100的样品匀液
6.1.4分别用10mL灭菌吸管按6.1.3所述操作程序将样品匀液制成10倍递増PT稀释液的样品
液,如10
6.1.5需要酶处理的样品,取需要酶处理的牛奶样品1:10PT样品匀液10mL加入酶原液1mL,在
灭菌试管中混合后放入36℃±1℃水浴中处理20min~30min,取出过滤备用