SN-T 1059.3-2002 进出口食品平板菌落计数 滤膜法.pdf

进出口食品平板菌落 计数 滤膜法
前??? 言
??? 本标准是按照GBT 1.1 1993标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计
数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会AOAC公定分析方法》1995年第16版17.2.05,结合SN 0168
1992出口食品平板菌落计数》样品制备中内容,并在实验的基础上编写而成。
??? 本标准的附录A是标准的附录。
??? 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
??? 本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。
??? 本标准主要起草人:陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。
??? 本标准首次发布。
1 范围
??? 本标准规定了进出口食品中平板菌落计数 滤膜法。
??? 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、辣椒粒、牛奶需用胰蛋白酶处理中菌落计数的检验。
2 引用标准
??? 下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
??? 本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
??? SN 0330 1994出口食品中微生物学检验通则
3 抽样
??? 按SN 0330规定执行。
4 检验方法
4.1 方法原理
??? 将滤膜放入滤器,过滤样品,使细菌留在膜表面。将滤膜放在胰化大豆 坚牢绿琼脂TSFA培养基上培养,产生深、浅绿色菌落,进行计数。
4.2 设备和材料
4.2.1 滤器:套,备有预滤器。
4.2.2 真空泵。
4.2.3 滤膜:有机或水相,孔径为0.45 m。
4.2.4 培养箱:36 1。
4.2.5 水浴箱:35 1。
4.2.6 吸管:1mL、10mL,具刻度。
4.2.7 玻璃三角瓶和广口瓶:200mL,500mL。
4.2.8 试管:17 mm 170 mm,玻璃制。
4.2.9 玻璃珠:直径5 mm。
4.2.10 平皿:直径90 mm。
进出口食品平板菌落 计数 滤膜法
4.2.11 天平:感量0.1 g。
4.2.12 均质器。
4.3 培养基和试剂
4.3.1 蛋白胨-吐温80PT稀释液见附录A A1。
前??? 言
4.3.2 胰化大豆-坚牢绿琼脂TSFA见附录A A2。
??? 本标准是按照GBT 1.1 1993标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计
数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会AOAC公定分析方法》1995年第16版17.2.05,结合SN 0168
1992出口食品平板菌落计数》样品制备中内容,并在实验的基础上编写而成。
4.3.3 三羟甲基胺甲烷Tris缓冲剂见附录A A3。
??? 本标准的附录A是标准的附录。
4.3.4 胰蛋白酶贮存液见附录A A4。
??? 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
4.4 样品制备
??? 本标准由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。
4.4.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装,则用75乙醇在包装开口处擦拭后取样。
??? 本标准主要起草人:陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。
4.4.2 样品匀液制备
??? 本标准首次发布。
4.4.2.1 固体或半固体食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL? PT稀释液的灭菌均质杯内,于8 000? rmin,均质1 min2 min,制成1∶
10的样品匀液。如样品均质时间超过2 min,应在均质杯外加冰水冷却。
1 范围
4.4.2.2 干燥或干粉食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL? PT稀释液的500mL灭菌广口瓶中瓶内预置适当数量的玻璃珠。迅速振摇,将
样品混匀,制成1∶10的样品匀液。振摇时,幅度30 cm,7 s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15 s代替手摇。
??? 本标准规定了进出口食品中平板菌落计数 滤膜法。
4.4.2.3 液体食品:用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL PT稀释液的500mL的灭菌广口瓶中,按4.4.2.2条中所述的方法,迅速振摇,制成1∶
??? 本标准仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水、单晶糖、饮料、辣椒粒、牛奶需用胰蛋白酶处理中菌落计数的检验。
10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5 cm。吸管内液体要在2 s4 s内完全排入稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。
2 引用标准
4.4.3 稀释样品匀液
??? 下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
4.4.3.1 用10mL灭菌吸管准确吸取1∶10的样品匀液10mL放入装有90mL? PT稀释液的200mL灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法,迅速振摇,制成1
∶100的样品液。
??? 本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
4.4.3.2 分别用10mL灭菌吸管按4.4.3.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品液如10 、10 、10
??? SN 0330 1994出口食品中微生物学检验通则
4.4.4 酶处理的食品
3 抽样
??? 需要酶处理的食品取1∶10? PT样品匀液10mL加酶原液1mL,在灭菌试管中混合放入35 1水浴中处理20 min30 min,取出过滤。
??? 按SN 0330规定执行。
4.5 过滤
4 检验方法
??? 对每份试样,选用适宜的三个连续稀释度的样液,每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上,以无菌操作将无
4.1 方法原理
菌滤膜放在抽滤底座上,用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10mL20mL无菌蒸馏水于滤器中,加入PT样品匀液10mL,打开真空泵,抽吸过滤,再加入
10mL15mL无菌蒸馏水,抽吸过滤,关闭真空泵。用无菌镊子将滤膜取出。
??? 将滤膜放入滤器,过滤样品,使细菌留在膜表面。将滤膜放在胰化大豆 坚牢绿琼脂TSFA培养基上培养,产生深、浅绿色菌落,进行计数。
4.6 培养
4.2 设备和材料
??? 以无菌操作将滤膜取出放于预先干燥的TSFA琼脂平板表面上,滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板,平放入36 1培养箱内培养
4.2.1 滤器:套,备有预滤器。
4.2.2 真空泵。
4.7 计数
4.7.1 4.2.3 滤 培膜:有机或水相,孔 养后,对每个TSFA琼脂平板上 径为0.45 产m生的深、 。 浅绿色菌落进行计数。25250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0
4,但不得超过24 h。
4.2.4 培养箱:36 1。
4.7.2 如只有个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内,先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克毫升〔gmL〕
样品中平板菌数。
4.2.5 水浴箱:35 1。
4.7.3 如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克毫升〔gmL〕样品中平
4.2.6 吸管:1m