十二烷基苯磺酸钠-异辛烷-正辛醇反胶束萃取苦参生物碱的研究.pdf

第40卷
分析化学( FENXI HUAXUE)研究报告
第2期
202年2月
Chinese Journal of Analytical Chemistry
208~212
DOI:10.3724/SP。J.1096.2012.10394
十二烷基苯磺酸钠-异辛烷一正辛醇反胶束萃取
苦参生物碱的研究
刘小琴范华均”余旭辉张来凤王李平
(广东药学院药科学院,广州51006)
摘要利用阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)与溶剂异辛烷和助溶剂正辛醇形成反胶東体系,
用于苦参生物碱的萃取分离。研究了pH值、表面活性剂浓度、増溶水量W、盐种类及浓度等因素对萃取的
影响。结果表明:SDBS异辛烷-正辛醇反胶束体系对苦参生物碱具有良好的选择性和较高苯取率,在pH5.0,
增溶水量。25,0.05 mol/L SDBS,0.05 mol/L KCI1,室温,萃取时间5min,反萃取时间20min的最佳萃取条件
下,氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱、槐果碱5种生物碱及总生物碱的萃取率和RSD分别在74.1%
87.2%和0.63%~3.0%之间。本方法选择性高,操作简便。
关键词十二烷基苯磺酸钠;反胶束萃取;苦参生物碱;高效液相色谱
1引言
反胶束萃取法( Reversed micelles extraction)是利用表面活性剂,通过静电作用力,选择性溶解带电
荷的物质进行分离。由于萃取条件温和,易保持物质活性,常用于分离蛋白质、氨基酸叫、酶例等大
分子生物活性物质,以及抗生素间、金属元素的分离
苦参是豆科植物苦参(Soか hora Flavescens Ait)的干燥根,貝有清热燥湿、杀虫、止痒等功效?。其
主要化学成分为苦参生物碱,具有抗肿瘤、抗心率失常、抗肝损伤及肝纤维化等多种功效の。苦参生物
碱作为一种新型的绿色农药近年逐渐应用于农业领域?。苦参生物碱主要来源于苦参、山豆根等植物
的提取分离苦,常采用溶剂萃取和离子交换等方法,其分离过程使用有机溶剂多,操作繁琐。本研究
以水为渀剂,采用微波辅助提取苦参中生物碱,利用阴离子表面活性剂形成的反胶束萃取体系,在酸性
条件下使苦参生物碱通过静电作用选择性地进入胶東“水腔”内核,从而与水提取液中的其它杂质分离。
结果表明,采用十二烷基苯磺酸钠(SDBS)-异辛烷ー正辛醇反胶東萃取体系,可较好地萃取分离話参生
物碱。本方法选择性高,设备简单,操作简便,有机溶剂残留少,可用于纯化和分离苦参生物碱。
2实验部分
2.1仪器与试剂
1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司); EXCEL全功能型微波化学工作平台(上海屹尧徵被化学
有限公司)。苦参药材(产地山西,批号:20080801),苦参碱、氧化苦参碱(纯度>98%,西安旭煌生物技术
公司),氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱《纯度>98%,南京泽郎医药科技公司);SDBS(分析纯,天津市福晨
化学试剂厂);异辛烷、正辛醇、KCI(分析纯,广州化学试剂厂);甲醇、乙腈(色谱级,德国默克公司);水
为二次蒸馏水。
2.2实验方法
2.2.1SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束的制备称取适量SDBS,加入溶剂异辛烷正辛醇(4?1,V/V),超
声溶解10min;加入适量水,在25℃恒温水浴中以180r/min振荡2h,静置过夜,配制成SDBS浓度为
0.05molL,增溶水量W。为25的SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束萃取剂,其增溶水量按W。=ma,oms
计算(W。:反胶東体系增溶水量即含水量;no:反胶束溶液中增溶水的摩尔数(mol);nsm:反胶朿溶液
011-04-25收稿;2011-09-2!接受
本文系广州市科技支撑计划项日(No.2008Z1-E301)和广东药学院师资队伍建设基金项目(No.52104109)资助
*E-mail:junhuafan(@126.com
第2期
刘小琴等:十二烷基苯磺酸钠-异辛烷-正辛醇反胶朿萃取苦参生物碱的研究
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中表面活性剂的摩尔数(mol)
2.2.2苦参生物碱的提取及反胶東萃取2准确称取0.5g苦参药材(过80目筛,0,18mm粒径)于提
取罐中,加入12.5mL水,在功率780W、温度110℃、压力1.52×10°Pa条件下提取5min,提取液以
3500r/min离心10min,合并上层清液,定容。
2.2.3反胶束萃取分离苦参生物碱取适量苦参生物碱提取液,用0.1mol/LHCl调至pH5.0,加入10
nl SDBS-异辛烷正辛醇反胶東萃取剂,室温下搅拌5min,转入分液漏斗中,静置,分层。将反胶束层
取出,加人10mL1 mol/L KCI溶液,搅拌20min,反萃取,转人分液漏斗,静置,反萃取两次,合并下层水
相,定容。经0.45m滤膜过滤后,按下述HPLC条件测定,并计算萃取率E(%),萃取率为反胶束溶液
增溶苦参生物破的量(mg)与苦参药材提取液中参生物碱的量(mg)的百分比。
2.2.4HPLC分析条件 Phenomenon Gemini C色谱柱(250mm×4.6mm,5um),流动相:乙腈-甲醇
0.1%氨水,进样量:20μL,流速:1mL/min,检测波长:220nm;柱温:室温,洗脱梯度:0min,8.5%甲醇
9.5%乙腈-82%氨水;6min,9.0%甲醇-9.0%乙腈-82%氨水;11~48min,16%甲醇-16%乙腈-68%氨水
结果与讨论
反胶束体系的选择与萃取条件的优化
3.1.1表面活性剂与pH值对萃取的影响选择阴离子表面活性剂二-(2-乙基己基)丁二酸酯磺酸钠
(AOT)、SDBS、十二烷基磺酸钠(SDS)、十二烷基硫酸钠(SLS)、二(2乙基己基)磷酸酯( DOLPA),分別
配制成6种反胶東体系:AOT-异辛烷、AOT-1% Tween80异辛烷、SDBS异辛烷-正辛醇、SD-异辛烷一正
辛醇、SLS-异辛烷-正辛醇、 DOLPA-异辛烷-正辛醇。10
- Aerosol OT(AOT) Isooctane
- AOT/Tween80/Isooctane
考察了各反胶束体系的形成及萃取性能。实验表
SDBS/Isooctane/N-octyalcohol
明,SLS不能形成均匀透明的反胶柬体系;SDS形成。80
Bis(2-ethylhexyl)phosphate
(DOLPA)/sooctane/n-octyalcohol
的反胶東体系不稳定,用于萃取会严重乳化;而其它60
4种可形成均匀透明、稳定的反胶東体系,故以不含
SLS和SDS的4种体系考察了以氧化苦参碱为目标
物,在不同的pH值下的萃取行为,结果见图1。由
20
图1可知,4种反胶束体系由于结构、性质和电荷分
布的差异,pH值对其萃取苦参生物碱的影响较大。
PH
除 DOLPA为磷酸酯结构,在pH7.0~9.0范围萃取率
图1p值对反胶束体系萃取氧化苦参碱的影响
最大外,其它3种体系则在pH5.0时萃取率达到最
Fig. 1 Effect of PH on extraction yield of oxymatrine
大,且以SDBS-异辛烷-正辛醇体系对苦参生物碱萃
with diffcrent reverse micelles
取效果最佳。
1.2溶剂及助溶剂的种类及用量对萃取的影响以SDBS表面活性剂作为反胶束萃取载体,选择异
辛烷、正已烷、环已