NYT 3001-2016 饲料中氨基酸的测定 毛细管电泳法.pdf

ICS65.120
B46
NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3001-2016
饲料中氨基酸的测定
毛细管电泳法
Determination of amino acids in feed-
Capillary electrophoresis
2016-11-01发布
2017-04-01实施
0:中华人民共和国农业部发布
NY/T3001-2016
前言
本标准按照GB/T
2009给出的规则起草。
本标准由农业部畜牧业司提出
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检測技术研究所[国家饲料质量监督检验中心
(北京)
本标准主要起草人:李丽蓓、冯忠华、王形、饶正华、崔昂、魏书林、张苏、严明、严寒、唐健、田静、
刘晓露
NY/T3001-2016
饲料中氨基酸的测定毛细管电泳法
范围
本标准规定了饲料中氨基酸测定的毛细管电泳法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和饲料原料中氨基酸含量的测定。可测定的
氨基酸种类包括胱氨酸、赖氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、肺氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、
丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸与异亮氮酸之和、酪氨酸和米丙氮酸的测定,不适用于蛋氮酸和色氨酸含量的
测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件·其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T1539194饲料中含硫氨基酸测定方法一离子交换色谱法
GB/T18246-2000饲料中氨基酸的测定
GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
样品需在6mol/L盐酸中水解成单一氨基酸,经异硫氰酸苯酯溶液(PITC)行生,再用毛细管电泳
的方法进行分离和定量。但待测氨基酸不同,前处理方法有所不同。其中,胱氨酸必须在水解前用过甲
酸氧化为磺基丙氨酸,才能衍生测定;而酪氨酸必须用未氯化的样品水解测定;其他氨基酸则可选用上
述任一方法处理测定
试剂和材料
除特姝注明外,本标准所用试剂均为分析纯和符合GB/T6682规定的一级水。
4.1碳酸钠溶液,c(Na2CO))=0.1mol/1L:取(0.715士0.001)g碳酸钠,加15mI.水于25mL的容量
瓶中溶解,用水定容。溶液在塑料瓶中保存2个月
4.2异硫氰酸苤酯溶液(PITC溶液):取0.4 ML PITC于25mL.棕色容量瓶中.用2-丙醇定容至刻度
并且充分混合均匀。溶液在2℃~8℃的冰箱中保存2个月。取用PC溶液尽量在通风柜中进行。
4.3氢氧化钠溶液:称取2g氢氧化钠于250mL玻璃杯中,用水稀释至100mL。在塑料瓶中保存6
个月。
4.4盐酸.c(HC!)=1.0mol/:吸取8.3ml.浓盐酸,置于容量瓶中,用水稀释并定容至100m
4.5磷酸氢二钠溶液:取(4.78±0.01)g十ニ水磷酸氢二钠于100mL容量瓶中,溶解后定容。溶液
保存2个月。
4.6磷酸二氢钠溶液:取(2.28±0.01)g一水合磷酸二氢钠或(2.57士0.01)g二水合磷酸二氢钠于
100mL容量瓶中,溶解后定容至刻度。溶液保存2个月。
4.7磷酸盐缓冲液pH7.7~7.8):取50mL磷酸氢二钠溶液(4.5)和5mL磷酸二氢钠溶液(4.6)于
100mL容量瓶中,用水定容。溶液保存2个月。
NY/T3001-2016
4.83-环糊精溶液:取(0.570±0.001)gβ-环糊精倒入50mL.烧杯中,加入25ml~30mlL水并充分
混合至完全溶解。若有必要,可将烧杯放在水浴锅中加热(温度不超过50℃)。溶解后转移至50mL的
容量瓶中,用水定容并充分混合。溶液保存2个月
4.9背景电解液:取10mL-坏糊精溶液(4.11)和10mL磷酸缓冲液(4.10)于25mL容量瓶中.用水
定容至刻度。溶液保存2周。
4.1013种单一氨基酸储备溶液,4.0mg/mL-:称取精氨酸盐酸盐(0.02420士0.0001)g.一水合组氨
酸盐酸盐(0.02700±0.000g,赖氨酸盐酸盐(0.C2190士0.00001)g,丙氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、甘
氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸各(0.020000.000)g,分别置于10mL.带
盖瓶中,分別准确加入5mL水溶解。若有必要,可在水浴锅中缓慢加热60て-70℃来充分地溶解氨基
酸。天冬氨酸和谷氨酸储备液保存1个月其他氮甚酸溶液保存4个月。
411两酸和的液9nR(Sズいや两种氢基用1m
盐酸(4.4)和9mL.水的雇合液添解、着有必要,在水浴锅慢加、で0℃,使其完全溶解。储备
液保存2个月。
412基丙氨酸储备でmn、9の0い要ダ于小我璃瓶中,加水溶
解并定容至10m。该槠备可保存3个
4.1313种氢基酸混合标准液分判取L丙、精氮等氨酸、组す氧酸异亮氮酸、亮
氨酸、赖氨酸,氨酸、丝数能、苏短酸的情备液て.コの)和2001丙氮酸和略年备液(4.11)于带
盖小瓶中.加人105は年充分混子、準种基最的质依年ロm-が谁溶液保存2周
4.148种氮基酸混合准溶液:分天等氮酸的备液()利基丙氧酸储备液
412:加人15充分令一基酸的所量た度与方mmら」で作液保存2
5仪器和设备
工
51毛细管电泳:正工取新H44互英毛细管(长でm内径m)波用为210m~260
nm的紫外检测器
5.2天平:感量0.0c0u-g、0.0009g、0.9g和.O1g
5.3 phit: (1-10)PIC0. 9AH
54离心机转速为5M以
mz-m刀
5.5千燥箱:恒温精确度不犬于￥2X
5.6热空气风扇或氮吹仪
7滤膜:0.22m。
6试样的制备和保存
按GB1469.1的规定抽取有代表性的样品,按四分法取样。按GB/T20195的规定制备试样,粉
碎过0.25mm孔径筛,充分混匀。装入密闭容器中保存。
7分析步骤
7.1样品前处理
7.1.1酸水解法
取0.1g(精确到0.0001g)试样于水解管中,按GB/T18246-2000中7.1.1.1常规酸水解法水
解。水解后,取出水解管,冷却至室温,用滤纸过滤,弃去初始滤液,收集剩下滤液于带盖的容器中,待行
生、测定。