脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其检测.pdf

粮油检测与加工
脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其沨
脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其检测
金秀娟朱旭东
(1辽宁抚顺粮油监督监测中心113006)
(2辽宁省粮油检验监测所110032)
摘要脱氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)又名呕吐毒素,是一种有很强细胞毒性、胚胎毒性
定致畸性、弱致癌性且影峋免疫系统的真菌毒素,污染严重的粮谷类食品和饲料,人畜食用
后健康将受到严重危害。文章对其危害、检测方法进行了部分议论,重点调查了解了抚顺地区
2008年产部分玉米样品在2009年夏季DON的平均含量。强调要加强对DON的了解,加强
对其检测,加强对谷物及其制品中DON含量的重视,以保证食用谷物及其制品的安全。
关键词脱氧雪腐镰刀菌烯醇(①ON)呕吐毒素检出量
中华人民共和国国家标准CB2715-2005《粮
鸭中毒出现食欲减退,体重下降,维鸭有呕吐症
食卫生标泐中的理化指标之真菌毒素限量指标增状
加了脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒1.2如何预防中毒情况发生
素A的限量。其中:脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量为
加强该项目的检测、防止原料和饲料发莓是预
1000g/kg。
防中毒的关键。原料要晒干储藏,并保持环境干燥。
经被荇菌毒素污染的饲料应脱毒后再饲喂动物。
1对脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒性的认识
通过研磨去壳、机械加工去皮均可以从原料中减掉
(P.aaa)产生足ー种有很强知胞再性、你2必会、で氧雪腐刀曲毒素
脱氧雪腐刀菌烯醇(DON)又名収吐毒素主大部分脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素
要由禾谷镰刀菌( Fusarium graminearum)黄色镰刀
胎海性、一定致睛性、弱致癌性,并且响免疫系看“今兇氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的
的真菌毒素。严重污染该毒素的粮谷类食品和饲
中华人民共和国国家标准GB/T5009.111
料.人畜食用后将严重危害健庶。
2003中規定了谷物及其制品(蛋糕、饼干、面包等)
脱氧雪腐镰刀菌烯醇中毒是人或动物采食被这中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON、呕吐毒素)的测定方
种毒素污染的粮食等原料而引起的,以食欲废绝、呕法,即:薄层色谱测定法及免疫测定方法( ELISA)
吐为特征的中毒性疾病。各种动物均可发生,其中
第一法的最低检出限为0.1mg/kg;第二法的
人、猪、犬、猫敏感家禽、牛和羊有一定的耐受性
最低检出限为0.1ng/kg
1.1临床中毒症状
2.1国家标准CBT5009.111-2003的适用范围
人中毒后食欲减退,呼吸困难,呕吐,腹泻
本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦)及其制品
猪中毒表现食欲废绝呕吐,腹泻,血便,皮肤、(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
黏膜红肿和坏死,体温下降。慢性中毒表现为食欲(DON、呕吐毒素)的测定。
减退,增重減慢,旱“僵猪”
2.2对第一法一薄层色谱测定法的看法
肉鸡中毒表现呼吸困难,精神沉郁,离群呆立,2.2.1薄层色谱测定法原理
平衡失调,反复春咽,腹泻
谷物及其制品中的脱氧镰刀菌烯醇经提取、净
收稿日期:2009-12-27
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°48°
粮油仓储科技通讯2010(1)
粮油检测与加工
化、浓缩和硅胶G薄层展开后,加热薄层板。由于显色后通过晦标仪读取吸光值。由于样品中DON
在制备薄层板时加入了三氯化铝,使脱氧镰刀菌烯的含量与吸光值的大小成一定比例关系,可根据吸
醇在365mm紫外光灯下显蓝色荧光,与标准比较。光值的大小来判断样品中DON的含量高低。进行
2.2.2薄层色谱测定法主要优缺点
定量检测时,需要同时加入已知浓度的DON标准
层色谱测定法是标准法.准确。缺点:操作步品进行间接竞争 ELISA,读取吸光值后,通过绘制
骤多,操作起来比较繁锁
标准曲线,可得到待测样品的DON含量数值
2.4.2需要注意的事项
2.3对第二法一免疫测定方法( ELSA)的看法
2.4.2.1需要自备的仪器及试剂
2.3.1免疫测定方法( ELISA)原理
仪器:酶标仪(具450nm滤光片)、小型粉碎
将已知抗原吸附在固相载体表面,洗除吸附抗机、天平、恒温箱
原,加入一定量抗体与待检试样(含有抗原)提取液
移液器:204L~200L量程移液器、200PL
的混合液,竞争温育后在固相载体表面形成抗原抗1000L量程移液器。
体复合物结合。洗除多余抗体成分,然后加入酶标
玻璃仪器:玻璃量筒、玻璃漏斗、三角烧瓶
记的抗免疫球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固
试剂:蒸馏水.
体表面的抗原抗体复合物结合,加入酶底物。在酶
其它:10mL试管、200T.吸头、1000L.吸头
的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色产物,定性中速滤纸、500mL洗瓶
通过酶底物的降解量根据标准曲线计算被测试样
FL.ISA软件: RIDAWIN EI.SA软件
中的抗原量
4.2.2仪器质控
3.2免疫测定方法( ELISA)主要优缺点
为使仪器保持最佳状态应建立维护和校正仪器
比第一法简单,相对比较容易操作。但还是比的标准程序,所需要控制的仪器包括:移液器、恒温
较繁锁、尤其是需要在4C条件下放置过夜,用时太箱(水浴箱)、洗板机和酶标仪
长,需要酶标检测仪
2.4.2.2.1移液器: ELISA操作中加样量小
2.4ELSA试剂盒检测法
(50I.~100T.),其准确性直接影响到实验结果
ELISA试剂盒检测法与免疫测定方法可用称量法进行检查:吸取刻度指示的水,万分之
( ELISA)原理一致,但操作更方使更快捷。该方法天平称重后计算吸量是否准确?需控制在土10%误
由国家粮食局标准质量中心、南京财经大学、河南工差以内
业大学、南昌博恒生物制品有限公司、江苏省苏微微2.4.2.2.2恒温箱:放置温度计于箱内,检査箱内
生物研究有限公司共同编制的《粮油主要卫生指标显示温度与实际温度之间是否一致,控制土1℃误差
测定技术要点》介绍。由于它方便快捷,我们通常采以内
用此种方法测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇
2.4.2.2.3洗板机:洗板后残留液不超过2L,拍
2.4.1原理简介
板后以纸不湿为宜。
本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附分析2.4.2.2.4酶标仪:定期维护光学组分,防止滤光
( Enzyme Linked Imm unosorbent A ssay, ELIS A)原片霉变,定期检测校正
理,快速检测大麦、玉米、大米、啤酒、麦芽汁中的脱2.4.2.3环境要求
氧雪腐镰刀菌烯醇( Deoxynivalenol,DON)
ELISA操作时,环境温度要求为20℃~25℃
其主要原理为:在预先包被有DON全抗原的试剂盒从冰箱中取出时,盒中所有试剂均需放置于
标板中,加入待检测样品及抗DON单克隆抗体,室温(20X~-25℃)10min~15min.进行温度平衡。
使待检測样品中的DON与酶标板中的DON全抗操作完毕后,请立即将试剂瓶及未用完板条密闭,放
原竞争结合抗DON单克隆抗体温育后洗板,再加置于4℃冰箱保存以各下次使用
入酶标记二抗使其与抗DON单克降抗体结合,最