小麦与小麦粉中呕吐毒素含量的比较.pdf

2011年第4期
现代面粉工业 Modern Flour Milling Industry
品质监控
小麦与小麦粉中呕吐毒素含量的比较
陈建伟1黄伟1陈谨华
1.江苏省粮食局粮油质量监测所南京2100112.中央储备粮江苏分公司南京210024
中幽分类号:TS21.2,TS210.7文献标识码:A文章编号:1674-5280(2011)00-051-02
呕吐毒素( Vomitoxin),又称脱氧雪腐镰刀菌680(具450mm滤光片),B1O-RAD(伯乐,产地:日
烯醇( deoxynivalenol,缩写DON),属单端孢烯族本;恒温培养箱:HwS-250型,上海精宏试验设备
化合物。单端孢霉烯族毒素共有150多种,是一有限公司;振荡器:HY-5回旋震荡器,常州国华电
类强有力的免疫抑制剂,所引起的典型症状是采器设备有限公司;电子天平:感量0.01g,天津天平
食量下降,DON是其中最重要的一种毒素。
仪器有限公司;移液器:10~100p1、100~1000ul,
DON的产生主要由镰刀菌属代谢产生,尤其 BIOHIT(芬兰百得)。
是禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、霄腐镰刀菌、粉红镰刀
3)试剂盒及试剂
菌等。产毒的基质主要有小麦、大麦、玉米、稻谷、蚕
试剂盒: DONELSA检测试剂盒,江苏苏微微生
豆等谷物。其理化性质如下
物有限公司;甲醇:分析纯AR,上海凌峰化学试剂有
①一般特性:纯品为白色结晶,熔点为151~限公司;水:纯净水。
153℃(醋酸乙基石油),分子式为CsH2Oa,分子量
4)讨算软件
为296
计算软件: RIDAWINELISA软件。
②光特点:紫外辐射下不显荧光
③溶解特性:易溶于水、乙酸乙酯、乙醇、甲2检测方法
醇、氯仿、丙酮等溶剂。不溶于正已烷、丁醇、石
国标GB/T5009.11-2003《谷物及其制品中脱
油醚;
氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》中规定了谷物及其制品
④稳定性较高:DON热稳定性较髙。据报道,DON(蛋糕、併干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
在食品加工中,烘焙温度210℃,油煎温度140℃、或(DON、呕吐毒素)的测定方法,即:薄层色谱测定法
煮沸,只能破坏50%。但在高压热蒸汽作用下可以和酶联免疫法( ELISA)。第一种方法的最低检出限
使其完全失活。
为0.1mgkg;第二种方法的最低检出限为1 ug/kg。
1材料设备与试剂
本次试验采用 ELSA试剂盒检测法。
1) ELSA检测原理
1)样品
在预先包被有DON全抗原的酶标板中,加入待
小麦样品:江苏省内轩取10份样品,每份1kg。检测样品及抗DON单克隆抗体,使待检测样品中的
2)主要仪器设备
DON与酶标板中的DON全抗原竞争结合抗DON
粉碎机:波通303,瑞典波通公司;密粉机:LRー单克隆抗体,温育后洗板,再加入酶标记二抗,使其
MM,无锡锡粮机械制造有限公司:粉筛:S(筛孔与抗DON单克隆抗体结合,最后加人酶标记二抗的
CB36,无锡錫粮机械制造有限公司;酶标仪:型号底物(显色液)进行显色,终止显色后通过酶标仪读
收稿日期:2011-04-01
作者筒介:陈建伟(1979-),男,工程师,从事粮油质量监测工作。
万方数据
品质监控
现代面工业
2011年第4期
取吸光值。由于样品中的DON的含量与吸光值的大量测定。(显色终止后,轻振荡板条,使孔内液体混合
小成一定比例关系,可根据吸光值的大小来判断样均匀后,应立即置于酶标仪内450nm波长读数,放
品中DON的含量高低。进行定量检测时,需要同时置时间过长,会使数据不准确)
加入已知浓度的DON标准品进行间接竞争 ELISA,
⑨使用 RIDAWINELSA等专用软件,选取双对
读取吸光值后,通过绘制标准曲线,可得到待测样品数模式绘制标准曲线
的DON含量数值。
2)样品前处理
试验数据及结论
将kg小麦样品用分样器分成两份,份进行臍
10份样品的试验结果见表1
粉,筛理后得到測试样用小麦粉;另1份继续均分至
表1小专与小麦粉试验数据
100g左右,粉碎后得到測试样用全麦粉。分別称取小
麦粉和全麦粉样品5g至三角瓶,加人50ml0%甲醇序号粉率呕吐毒素含量gkg
比值
%小麦粉全麦粉小麦粉/全麦粉
溶液(体积比1:9),充分振荡15min,以定量滤纸
号样6581494
1554
快速过潓,收集滤液。取适量滤液进行 EASA检2号样6452136234
0.91
测分析
3号样67.1
1426
3)环境要求
4号样67
173
1,15
境温度要求为2025℃。试剂盒从冰箱中取出时,5号样64.64824831.00
盒中所有试剂均需放置于室温(20-25℃)10-15min,进6号样62
132
行温度平衡,操作完毕后,立即将试剂瓶及未用完板7号样6,9306
1.15
条密闭,放置于4℃冰箱保存以备下次使用。
8号样67.1
308
0.98
4)操作步骤
9号样66220
0
①插入足够数量的酶标板微孔于反应板支架10号样651300
309
0.9
上。标记标准品孔和样品孔。每孔加入250l左右
表1中比值小于1说明小麦外部(主要指果皮
洗滌液,放置1min,甩掉后拍干。重复洗涤1次。和种皮)含有呕吐毒素较内部(主要指胚乳)多,比
②标准品孔加入50pDN标准溶液值大于1说明小麦内部含有呕吐毒素较外部多。试
(0,12.5,25,50,100,200)x102,样品孔加入50u山验结果可知有80%的样品处于0.8~1.2之间,这表
样品提取液(按要求的量在微孔板13处加入试剂,明小麦的内外部都有呕吐毒素存在,且含量都相
選免溢出及碰触孔底,防止产生气泡。每次加样需更当;而通过小麦粉的加工过程去除呕吐毒素是不可
换吸头,避免交叉污染)。
能的。
③每孔都加入50l抗0N单克隆抗体工作
粮食中呕吐毒素主要是由真菌毒素引起的,加
液。37℃,恒温孵育60min(温育需保证温度的均一强田间管理和储存期间的管理是抑制真菌生长的两
性,避免由于温度的不均匀而造成边缘效应,影响数个重要环节,另外也需要建立健全国家监测体系,采
据的准确性,可在酶标板微孔上放置盖板或白纸)。取有效的挖制措施,减少呕吐毒素对人体及动物的
④每孔加人250以左右洗涤液,放置1min,用危害,保证谷物及其制品的食用安全。
掉后拍干。重复洗涤反应孔3次。
⑤每孔都加人100以1酶标记的第二抗体结合
参考文献
物工作液。37℃,恒温反应30min。
IJGB/T5009.11-2003谷物及其制品中脱氧雪腐刀
⑥每孔加人250以左右洗涤液,放置1min,甩蒸烯的沢定?
掉后拍干。重复洗涤反应孔4次。
]孙秀兰,等粮油食品中岖吐毒素危害及风险分析
⑦各加人50以l底物液和50山显色液,恒温食与油,20(3):41-4
育箱中37℃显色10~15min。
「3金秀娟,等.脱氧雪腐镰刀蒽烯醇的检测.棁食加工,
⑧加入50以停止液。用酶标仪