GB 12392-1990 蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法(荧光法和2,4-二硝基苯肼法).pdf

中华人民共和国国家标准
蔬菜、水果及其制品中总抗坏血
酸的测定方法(荧光法和2,4-
GB12392-90
硝基苯肼法)
Method for determination of total ascorblc acid In frults,
vegetables and derived products-FluorometrIc
method and colorlmetrlc method
1主题内容与适用范围
本标准规定了用荧光法和2,4-二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸。
本标准适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
第一篇荧光法
本标准参照采用国际标准ISO6557/1-1986《菜、水果及其制品中抗坏血酸的测定方法》
2原理
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有荧
光的喹喔啉(quino xa line),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食
物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质产生的干扰,最
小检出限0.022ug/mL。
3试剂
本实验用水均为蒸馏水。
3.1偏磷酸-乙酸液:称取158偏磷酸,加0mL冰乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶
解,冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存710d。
3.20.15mol/L硫酸:取10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200mL
3.3偏磷酸-乙酸-硫酸液;以0.15mol/硫酸液为稀释液,其余同3.1配制。
3.450%乙酸钠溶液:称取500g乙酸钠(CH COONa3H2O),加水至1000mL
3.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100mL乙酸钠溶液(3.4)中临用前配制
3.6邻苯二胺溶液:称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100mL
3.7抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)(临用前配制):准确称取50mg抗坏血酸,用溶液(3.1)
溶于50mL容量瓶中,并稀释至刻度。
3.8抗坏血酸标准使用液(100ug/mL):取10mL抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释
至100mL。定容前试pH值,如其pH>2.2时,则应用溶液(3.3)稀释
3.90.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.8百里酚蓝,加0.02mo/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵
中华人民共和国卫生部1990-03-19批准
1990-12-01实施
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GB12392-90
中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75mL,磨溶后用水稀释至250mL
变色范围:pH值等于1.2
红色
pH值等于2.8
黄色
pH值大于4
蓝色
3.10活性炭的活化:加2008炭粉于1L1+9盐酸中,加热回流1~2h,过滤,用水洗至滤液中
无铁离子为止,置于110~120℃烘箱中干燥,备用。
4仪器和设备
4.1实验室常用设备。
4.2荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
4.3捣碎机
5操作方法
5.1样品液的制备:称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液(3.1),倒入捣碎机内打成匀浆,
用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或蓝色,则
用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其pH为1.2。匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定。当
样品液含量在40~100ug/mL之间,一般取0g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL,过滤,
滤液备用。
5.2测定步骤
5.2.1氧化处理:分别取样品滤液(5.1)及标准使用液(3.8)各100mL于200mL带盖三角瓶中,
加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化
液和标准氧化液,待测定。
5.2.2各取10mL标准氧化液于2个100m容量瓶中,分别标明“标准”及“标准空白”
5.2.3各取10mL样品氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“样品”及“样品空白”。
5.2.4于“标准空白”及“样品空白”溶液中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用
水稀释至100mL,在4℃冰箱中放置2~3h,取出备用。
5.2.5于“样品”及“标准”溶液中各加入5mL50%乙酸钠液,用水稀释至100mL,备用。
5.3标准曲线的制备
取上述“标准”溶液(5.2.5)(抗坏血酸含量10ug/mL)0.5、1.0、1.5和2.0mL标准系
列,取双份分别置于10mL带盖试管中,再用水补充至2.0mL。荧光反应按5.4
5.4荧光反应
取(5.2.4)中“标准空白”溶液,“样品空白溶液及(5.2.5)中“样品”溶液各2mL,分
别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应
35min,于激发光波长338nm、发射光波长20nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标
准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或进行相关计算,其直线回
归方程供计算时使用。
6计算
x=F1(1)
式中:样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量,mg/100g
c由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度,u/mL
试样质量,g;
GB12892-90
F样品溶液的稀释倍数;
荧光反应所用试样体积,mL。
7结果的允许差
同一实验室平行或重复测定结果相对偏差绝对值<10%
第二篇2,4-二硝基苯肼比色法
8原理
总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗
坏血酸,再与2,4一二硝基苯肼作用生成红色脎根据在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成
正比,进行比色定量。
9试剂
本实验用水均为蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。
9.14.5mol/L硫酸:谨慎地加250mL硫酸(比重1.84)于700mL水中,冷却后用水稀释至
1000mL
9.285%硫酸:谨慎地加900mL硫酸(比重1.84)于100mL水中
9.32%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g2,4-二硝基苯于100mL4.5mol/L硫酸内,过滤。
不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤。
9.42%草酸溶液:溶解208草酸(H2C2O4于700mL水中,稀释至1000mL
9.51%草酸溶液:稀释500mL2%草酸溶液到1000mL。
9.61%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.72%硫脲溶液溶解10g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.81mol/L盐酸:取100mL盐酸,加入水中,并稀释至1200mL
9.9抗坏血酸标准溶液:溶解100mg纯抗坏血酸于100mL1%草酸中,配成每毫升相当于1mg抗
坏血酸。
9.10活性炭:将100g活性炭加到750mL1mol/L盐酸中,回流1~2h,过滤,用水洗数次,
至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干
检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液
滴人,如有铁离子则产生蓝色沉淀。
10仪器和设备
10.1恒温箱:37±0.5℃。<