GBT5009.86-2003 蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基苯肼法).pdf

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中华人民共和国国家标准
GB/T5009.86-2003
代替GB/T123921990
蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的
测定(荧光法和2,4-二硝基苯肼法
Determination of total ascorbic acid in fruits
vegetables and derived products-f'lourometric
method and colorimetric method
2003-08-11发布
2004-01-01实施
中华人民共和卫生发布
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GB/T5009.862003
前言
本标准第一法对应于1SO6557-1:1986《蔬菜、水果及其制品中抗坏血酸的测定方法》和AOAC
967.22《维生素制品中总维生素C的微量荧光测定方法》。
本标准与ISO6557-1和AOAC967.22的一致性程度为非等效。
本标准代替GB/T12392-1990《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法(荧光法和2,4
硝基萃肼法)》。
本标准与GB/T12392-1990相比主要修改如下:
一修改了标准的中文名称,标准中文名称改为《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法
和2,4-二硝基苯肼法)》;
按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行
了修改
本标椗由中华人民共和国卫生部提出并归口
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。
本标准主要起草人:王光亚、杨晓莉、田立新。
原标准于1990年首次发布,本次为第一次修订。
GB/T5009.86-2003
蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定
(荧光法和2,4-二硝基苯肼法)
1范
本标准规定了用荧光法和2,4-二硝基苯肼比色法测定食品中的抗坏血酸。
本标准适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
本方法检出限:荧光法为0.022Ag/mIL,2,4-二硝基苯肼比色法为0.1gg/mL。线性范围:荧光法
为5g/mL~20以g/mL,2,4-二硝基苯肼比色法为1g/mL~12pg/mL
第一法荧光法
2原理
试样中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有荧光的
喹唔啉( quinoxaline),其荧光强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食品中抗坏血酸和
脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰
试剂
3.1偏礴酸-乙酸液:称取15g偏磷酸,加人40mL冰乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷
却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7d~10d。
3.20.15mol/L硫酸:取10mL硫酸,小心加人水中,再加水稀释至1200mL。
3.3偏磷酸-乙酸硫酸液:以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同3.1配制。
3.4乙酸钠溶液(500g/L):称取500g乙酸钠(CH3 COONA?3H2O),加水至1000ml
3.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于100mL乙酸钠溶液(3.4)中。临用前配制。
3.6邻苯二胺溶液(20mg/L):称取20g邻苯二胺,临用前用水稀释至100mL
7抗坏血酸标准溶液(1mg/mL)(临用前配制):准确称取50mg抗坏血酸,用偏磷酸-乙酸溶液
(3.1)溶于50mL容量瓶中,并稀释至刻度。
3.8抗坏血酸标准使用液(100g/mL-):取10m,抗坏血酸标准液,用偏僯酸-乙酸溶液稀释至
100mL,定容前试pH值,如其pH>2.2时,则应用偏磷酸乙酸-硫酸溶液(3.3)稀释
3.90.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.1g百里酚蓝,加0.02mol/IL.氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中
研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75mL,磨溶后用水稀释至250mL
变色范围
pH值等于1.2
红色
pH值等于2.8
黄色
pH值大于4
蓝色
3.10活性炭的活化:加200g炭粉于1L盐酸(1+9)中,加热回流1h~2h,过滤,用水洗至液中无
铁离子为止,置于110℃~120℃烘箱中干燥,备用
4仪器
4.1实验室常用设备
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4.2荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
4.3捣碎机。
5分析步骤
1试样的制备
称取100g鲜样,加100mL偏磷酸-乙酸溶液(3.1),倒人捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调
试匀浆酸碱度。如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或蓝色,则用偏磷酸-乙酸一硫酸溶液
稀释,使其pH为1,2。均浆的取量需根据试样中抗坏血酸的含量而定。当试样液含量在40g/mL
100ug/mL之间,一般取20g匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL,过滤,滤液备用。
5.2测定
5.2.1氧化处理:分别取试样滤液(5.1)及标准使用液(3.8)各100mL.于200mI带盖三角瓶中,加
2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即试样氧化液和标准
氧化液,待测定。
5.2.2各取10mL标准氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“标准”及“标准空白”.
5.2.3各取10mL试样氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“试样”及“试样空白”。
5.2.4于“标准空白”及“试样空白”溶液中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至
100mnlL-,在4℃冰箱中放置2h~3h,取出备用。
5.2.5于“试样”及“标准”溶液中各加人5mI-500g/I乙酸钠液,用水稀释至100mL,备用。
5.3标准曲线的制备
取上述“标准”溶液(5.2.5)(抗坏血酸含量10g/mL)0.5、1.0、1.5和2.0mL标准系列,取双份分
别置于10mL带盖试管中,再用水补充至2.0mL。荧光反应按5.4操作。
5.4荧光反应
取5.2.4中“标准空白”溶液,“试样空白”溶液及5.2.5中“试样”溶液各2ml,分别置于10mL带
盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mI.邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发光
波长338nm、发射光波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为
纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或进行相关计算,其直线回归方程供计算使用。
6结果计算
见式(1)。
X
F
式中
X一试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量,单位为毫克每百克(mg/100g);
c由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度,单位为微克每毫升(g/mL)
m-一试样的质量,单位为克(g)
荧光反应所用试样体积,单位为毫升(mL)
F一试样溶液的稀释倍数。
计算结果表示到小数点后一位
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
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