蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法(荧光法和2,4-二硝基苯肼法) GB-T 12392-90.pdf

中华人民共和国国家标准
蔬菜、水果及其制品中总抗坏血
酸的测定方法荧光法和 2,4-二硝基苯肼法 GBT 12392-90
1 主题内容与适用范围
本标准规定了用荧光法和 2,4-二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸。
本标准适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
第篇 荧 光 法
本标准参照采用国际标准 ISO 655711986蔬菜、水果及其制品中抗坏血酸的测
定方法》。
2 原理
样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺OPDA反应生成
有荧光的喹喔啉quinoxaline,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在定条件下成正比,
以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质产生的
干扰,最小检出限 0.022μgmL。
3 试剂
本实验用水均为蒸馏水。
3.1 偏磷酸-乙酸液:称取 15g 偏磷酸,加入 40mL冰乙酸及 250mL 水,加温,搅拌,使之逐渐
溶解,冷却后加水至 500mL。于 4冰箱可保存 7l0d。
3.2 0.l5mol L硫酸:取 10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至 1200mL。
3.3 偏磷酸-乙酸-硫酸液:以 0.15molL硫酸液为稀释液,其余同 3.1 配制。
3.4 50乙酸钠溶液:称取 500g 乙酸钠CH3COONa3H2O,加水至 1OOOmL。
3.5 硼酸-乙酸钠溶液:称取 3g 硼酸,溶于 l00mL乙酸钠溶液3.4中。临用前配制。
3.6 邻苯二胺溶液:称取 20mg 邻苯二胺,于临用前用水稀释至 100mL。
3.7 抗坏血酸标准溶液1mgmL 临用前配制:准确称取 50mg 抗坏血酸,用溶液3.1
溶于 50mL容量瓶中,并稀释至刻度。
3.8 抗坏血酸标准使用液l00μgmL:取 10mL抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀
释至 100mL。定容前试 pH 值,如其 pH2.2 时,则应用溶液3.3稀释。
3.9 0.04百里酚蓝指示剂溶液:称取 0.1 百里酚蓝,加 0.02molL氢氧化钠溶液,在玻璃研
钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为 10.75 mL,磨溶后用水稀释至 250 mL。
变色范围:pH值等于 1.2 红色
pH值等于 2.8 黄色
pH值大于 4 蓝色
3.10 活性炭的活化:加 200g 炭粉于 1L19 盐酸中,加热回流 12h,过滤,用水洗至滤液中
无铁离子为止,置于 110120 烘箱中干燥 中华人民共和国国家标准 ,备用。
4 仪器和设备 蔬菜、水果及其制品中总抗坏血
4.1 实验室常用设备。 酸的测定方法荧光法和 2,4-二硝基苯肼法 GBT 12392-90
4.2 荧光分光光度计或具有 350 nm 及 430 nm 波长的荧光计。
4.3 Method 捣碎机。for determination of total ascorbic acid in fruits,vegetables
5━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 操作方法
5.1 1 主题内容与适用范围 样品液的制备:称取 100g 鲜样,加 100g 偏磷酸-乙酸溶液3.1,倒入捣碎机内打成
匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈
黄色或蓝色 本标准规定了用荧光法和 ,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释 2,4-二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸。 ,使其 pH 为 1.2。匀浆的取量需根据样品中
抗坏血酸的含量而定。当样品液含量在 本标准适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。 40100μgmL 之间,般取 ZOg 匀浆,用偏磷酸-
乙酸溶液稀释至 100mL,过滤,滤液备用。
5.2 测定步骤 第篇 荧 光 法
5.2.1 本标准参照采用国际标准 氧化处理:分别取样品滤液 ISO 65571 5.1及标准使用液 1986蔬菜、水果及其制品中抗坏血酸的测 3.8各 100mL 于 200mL 带盖三角
瓶中 定方法》 ,加 2g 。 活性炭,用力振摇 1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,
即样品氧化液和标准氧化液 ,待测定。
5.2 2 原 .2 各 理 取 10mL 标准氧化液于 2 个 100 mL 容量瓶中,分别标明样准及样准空白。
5.2 .3 各 取 10mL 样品氧化液于 2 个 100 mL 容量瓶中,分别标明样品及样品空白。
5.2.4 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后 于标准空白及样品空白溶液中各加 5mL 硼酸 ,与邻苯二胺 -乙酸钠溶液 OPDA ,混合摇动 反应生成 15min,
用水稀释至 有荧光的喹喔啉 100mL, quinoxaline, 在 4冰箱中放置 其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在定条件下成正比 23h,取出备用。 ,
5.2.5 以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 于样品及标准溶液中各加入 5mL 50 乙酸钠液,用水稀释至 100mL,备用。
5.3 脱氢 标准曲线的制备 抗坏血酸与硼 酸可形成复合物而不与 OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质产生的
干扰 ,最小检出限 取上述标准溶液 0.022μgmL 5.2 。 抗坏血酸含量 10μgmL0.5、1.0、1.5 和 2.OmL 标准系
列,取双份分别置于 10mL带盖试管中,再用水补充至 2.0mL。荧光反应按 5.4。
5.4 3 试剂 荧光反应
本实验用水均为蒸馏水。 取5.2.4中标准空白溶液 ,样品空白溶液及5.2.5中样品溶液各 2mL,
分别置于 3.1 偏磷酸 10-mL 乙酸液 带盖试 :称取 管中。在 15g 偏磷酸 暗室迅速向 ,加入 40mL 各管中加入 冰乙酸及 5m 250mL L 邻苯二胺 水,加温 溶液 ,搅拌 ,振摇 ,使之逐渐 混合,在室
温 溶解 ,冷却后加水至 500mL。于 4冰箱可保存 7l0d。
3.2 0.l5mol L硫酸:取 10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至 1200mL。
强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或
3.3 偏磷酸-乙酸-硫酸液:以 0.15molL硫酸液为稀释液,其余同 3.1 配制。
进行相关计算,其直线回归方程供计算时使用。
3.4 50乙酸钠溶液:称取 500g 乙酸钠CH3COONa3H2O,加水至 1OOOmL。
3.5 硼酸-乙酸钠溶液:称取 3g 硼酸,溶于 l00mL乙酸钠溶液3.4中。临用前配制。
6 计算
3.6 邻苯二胺溶液:称取 20mg 邻苯二胺,于临用前用水稀释至 100mL。
3.7 抗坏血酸标准溶液1mgmL 临用前配制:准确称取 50mg 抗坏血酸,用溶液3.1
溶于 50mL容量瓶中,并稀释至刻度。
3.8 抗坏血酸标准使用液l00μgmL:取 10mL抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀
释至 100mL。定容前试 pH 值,如其 pH2.2 时,则应用溶液3.3稀释。
式中:X──样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量,mg100g;
3.9 0.04百里酚蓝指示剂溶液:称取 0.1 百里酚蓝,加 0.02molL氢氧化钠溶液,在玻璃研
c──由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度,μgmL;
钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为 10.75 mL,