GB∕T 18869-2019 饲料中大肠菌群的测定.pdf

ICS65.120
CB
中华人民共和国国家标准
GB/"T18869-2019
代替GB/"T18869-2002
饲料中大肠菌群的测定
Determination of coliforms in feeds
2019-06-04发布
2020-01-01实施
国家市场监督管理总局
中国国家标准化管理委员会
发布
GB/T18869-2019
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替GB/T188692002《饲料中大肠菌群的测定》。
本标准与GB/"T18869~2002相比,主要技术内容修改如下
修改了适用范围(见第1章,2002年版的第1章)
増加了术语和定义(见第3章)
修改了原理的描述(见第4章,2002年版的第3章);
增加了LST发酵法(见8.3)。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检測技术研究所[国家伺料质量监督检验中心
(北京)
本标准主要起草人:李丽蓓、刘晓露、李胜、王彤
本标准的历次版本发布情况为
GB/T18869-2002。
GB/T18869-2019
饲料中大肠菌群的测定
范围
本标准规定了恫料中大肠菌群的测定方法
本标准适用于伺料和饲料添加剂中大肠菌群的测定
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列定义适用于本文件
大肠菌群 coliforms
在一定培养条件下能发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌
最可能数 most probable number;MPN
基于泊松分布的一种间接计数方法
原理
将待测样品稀释至适当浓度并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计
学概率论推算表,査出待测样品中大肠菌群的最大可能数
培养基或材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂
5.1水:符合GB/T6682中三级水的要求
5.2乳糖胆盐发酵培养基;见附录A中A.1。
5.3伊红美蓝琼脂:见附录A中A.2。
5,4乳糖发酵培养基:见附录A中A,3
5.5革兰氏染色液:见附录A中A.4。
5.6月桂基硫酸韞胰蛋白胨( lauryl sulfate tryptose,lST)肉汤:见附录A中A.5。
5.7煌绿乳糖胆盐({ brilliant green lactose bile,BGLB)肉汤:见附录A中A.6。
5.8磷酸盐缓冲液:见附录A中A.7。
5.9无菌生理盐水:见附录A中A.8
GB/T18869--2019
5.10氢氧化钠溶液:c(NaOH)=1mol/L。见附录A中A.9。
5.11盐酸溶液:c(HCI)=1mol/L。见附录A中A.10
6仪器设备
天平:感量0.1g
6.2恒温培养箱:36℃士1℃。
6.3无菌吸管;1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
6.4无菌锥形瓶:容量500ml。
6.5均质器。
6.6振荡器。
6.7显微镜:普通生物显微镜
6.8pH计或精密pH试纸。
7样品
7.1采样原则
样品的采集应遵循随机性、代表性的原则。采样过程应遵循无菌操作程序,防止一切可能的外来
7.2采样方法
7.2.1应在同一批次产品中采集样品,每件样品的采样量应满足微生物指标检验的要求,一般不少于
500g(mL)。
7.2.2独立包装小于、等于500g的固态产品或小于、等于500mL.的液态产品,取完整包装。
7.2.3独立包装大于500mL.的液态产品,应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体,使其达到均质后采集
适量样品,放入同一个无菌采样容器内作为一件样品。
7.2.4独立包装大于500g的固态产品,应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品,放
入同一个无菌采样容器内作为一件样品。
7.3采集样品的贮存和运输
7.3.1应尽快将样品送往实验室检验。
7.3.2应在运输过程中保持样品完整。
7.3.3应在接近原有贮存温度条件下贮存样品,或采取必要揹施防止样品中微生物数量的变化
8试验方法
8.1试验方法类别
本标准试验方法分为乳糖胆盐发酵法和1ST发酵法,乳糖胆盐发酵法适用于限量要求以
MPN/100g(mL)为单位的产品,LST发酵法适用于限量要求以MPN/g(mL)为单位的产品。
8.2乳糖胆盐发酵法
8.2.1试样的稀释
8.2.1.1固态和半固态样品:称取25g试样,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质