BSA-ISCOMs对欧洲鳗鲡免疫效应及抗细菌性病原的效果研究.pdf

第36卷第4期
应用海洋学学报
ol.36、Na.4
017年11月
Journal of Applied Oceanography
Nov.、2017
BSA- ISCOMS对欧洲鳗鲡免疫效应及
抗细菌性病原的效果研究
陈秀霞,龚晖,许斌福,郑在予,池洪树,陈永聪
(福建省农业科学院生物技术研究所,福建禍州350003
摘要:为证实免渡刺激复合物( ISCOMS)的非特异免疫增强作用,将牛血清白蛋白(ESA)制备成
TSCOMS(BSA- -ISCOMS).将欧洲鳗鲡( Anguilla anguilla)随机分为3銀,分别用BSA- ISCOMS、BSA和
磷酸盐缓冲液(PBS,对照组)腹腔注射免疫.二次免疫完成后第30d采血,测血清部分非特异性免
疫指标,剩余鳗鰤分别用创伤孤茵( vibrio vulnificus)和嗜水气单胞菌( Aeromona hydrophila)攻毒.结
果显示,BSA- ISCOMS组的血清溶菌酶活力显著高于BSA组和对照组(P≤0.05);超氯化物歧化酶
(SOD)和补体C3活力与对照组无显著差异(P>0.05)攻毒结果显示,BSA- ISCOMS组的存活率显
著高于BSA组和对照组(P≤0.05),对创伤孤菌和嗜水气单胞菌攻击的相对免疫保护率分别为
43.3%和51.7%,表明BSA- ISCOMS能有效增强欧洲鳗鲡对主要病原创伤孤菌和嗜水气单胞菌的
抗病能力
关键词:海洋生物学;免疫刺激复合物;欧洲鳗;免疫效应;细菌性病原;溶茵酶
DO:10.3969/J.ISSN.20954972.2017.04.013
中图分类号:35
文献标识码:A
文章编号:20954972(2017)04-0558-07
欧洲鳗( Anguilla anguilla)是原产于大西洋学者们対 ISCOMS在体液免疫、细胞免疫和非特异
的海洋洄游鱼类,广泛分布在欧洲大陆沿海、北非及免疫反应等现代免疫学和疫苗学领域开展了大量的
地中海一带,其经济和营养价值高,是欧洲和亚洲各研究工作““.与 ISCOMS对乳动物免疫效某的
广泛养殖的鳗品种.20世纪90年代初欧洲鲠研究下作相比,有关 ISCOMS对鱼类免疫功能的影
鲡养殖在中国兴起,高密度、粗放式养殖以及环境差响研究的报道甚少.
异导致的病害问题制约了欧洲鳗养殖业的发展
由于 ISCOMS可通过粘膜途径吸收和提呈抗
实践表明接种疫苗是防治水产病害安全有效的手原,因此很适合在水产疫甫中使用.在过去的研
段3,但是疫苗不具有广谱性.养殖鱼类往往感染究工作中1,将重组表达的嗜水气单胞菌气溶素
多种病原,而同时接种多种疫苗不仅耗时费力而且嵌入 ISCOMS,通过腹腔注射、1服和浸浴方式免疫
经济成本高.因此,研发安全、高效并具有普适性欧洲鳗鲡,获得有效的免疫保护,同时发现 ISCOMS
的免疫增强剂或免疫佐剂对水产养殖业的健康可持能显著提高特异的血清抗体效价和T淋钽细胞增
续发展具有重要意义
殖转化水平.其中,在用2.0x10°CHU的時水气单
免疫刺激复合物( ISCOMS)是出三萜皂甙Qui-胞菌攻毒实验中,重组的硫氧还蛋白-气溶素融合蛋
lA、胆固醇、卵僯脂与抗原相互作用而形成的直径约白 ISCOMS、硫氧还蛋白 ISCOMS和硫氧还蛋门-气溶
40nm的球形笼格状颗粒,可通过肠外或粘膜途径给素融合蛋白对鳗鲡的相对免疫保护率分别为
药的抗原提呈系统56. ISCOMS能诱导广谱的免疫83.3%、50%、0.这些实验结果暗示, SCOMS可
反应,包括主要组织相答性复合体(MHC)I、Ⅱ类诱导受免鱼产生较强的非特异性免疫应答
细胞反应和细胞毒性T淋巴细胞反应”?.近年来,
为证实 ISCOMS的非特异免疫效果,研制广谱
收稿日期:2017-0405
基金项目:福建省自然科学基金资助项日(201501106);福建省农业科学院科支创新闭队重点科研资助项目くCXTD201106)
作者简介:陈秀霞(1977~),女,副研究员;E-muil; xiuxiaclutn@163.cum
通讯作者:晖(1971-),男,研究员;E-mail:ghonim@163.com
万方数据
4期
陈秀霞,等:BSA- ISCOMS对欧洲缦鲡免疫效痖及抗细菌性病原的效果研究
性免疫制剂,本研究用牛血清白蛋白(RSA)制成干,用透射电镜(H17700, HITACHI)观察.
ISCOMS,将BSA- ISCOMS腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,并1.5溶血性分析
对血清非特异免疫相关指标以及嗜水气单胞菌和创
将从健康欧洲鳗鲡采集的血液(每份5cm')立
伤创菌攻击后的免疫保护率进行了评价
即移人含有38mg/cm桁檬酸钠的无菌PBS缓冲液
1材料与方法
中.然后加无菌PBS于4℃条件下2000r/min离心
5min,弃上清,如此重复3次.接着,取沉淀用无菌
1.1实验动物及饲养管理
BS(0.01mol/dm3,pH值为7.4)稀释至红细胞
供试健康欧洲鳗鲡购白福建省长乐海洲鳗场,浓度为10mg/(cm2,然后,将红细胞悬液贮存于玻璃
该场养殖水为海边近岸沙滤地下水,盐度范园为
瓶中置于4℃冰箱过夜
10.供试健康欧洲鳗鲡平均规格25g,带水运回实
各组待测样品(样品1:含2mg/em2BSA的
验室后,置于500dm3水缸暂养1周,水温为22
BSA- SCOMS;样品2:含4mg/ cm' BSA的BSA
24℃,溶氧5mg/dm3.每日投喂相当于实验鱼体重 ISCOMS;样品3:8mg/ CM'BSA的BSA- ISCOMS:样品
1%的饲料,换水1/3并及时清理排泄物,以保持水4:.1mg/em2 Quil A;样品5:2n/em3BSA)分别用
质稳定.
PRS缓冲液倍比稀释,加入96孔微量板,每孔50
1.2攻毒用病原茵
mm3,与等量的欧洲鳗鲡红细胞悬液混匀,37℃水浴
攻击用嗜水气单跑菌( Aerorruona hydrophila)1h后,4℃静置16h观察.以溶解半数红细胞的最高
ZN1来源于患败血症的欧洲鳗鲡肝脏,为自行分离
稀释度为溶血价.实验设2组平行
鉴定、保种.攻击用创伤弧菌( Vibrio vulnificus
6免疫
FJO3-X2菌株来源于患溃疡症的欧洲鳗鲡血液,为
将供试鳗鲡随机分为3组,每组设2个平行缸
自行分离、鉴定、保种?.
每伍养32尾.BSA- ISCOMS组实验鱼毎尾腹腔注射
1.3BSA- ISCOMS制备
0.2cm的BSA- ISCOMS(用PBS将4mg/ cm BSA
BSA- ISCOMS的制备参照文献L15]的方法: BSA ISCOMS稀释至250g/em3):BSA组实验鱼每尾腹
用PBS缓冲液(0.01mol/dum',pH为7,4)稀释成蛋腔注射0.2cm的BSA(用PBS将4mg/ cm BSA稀
白浓度为2mg/em的溶液,然后加人Mega-10(N-释至250pg/am3);对照组实验鱼每尾腹腔注射O.
癸酰基N-甲基糖胺, Amresco公司产品),使终浓cm的PBS.间隔15d后,以相同方法进行第二次注
度为20mg/cm.于37℃水浴4h后,依次加入Q证·射免疫
LA(丹麦 Brenntag Biosector公司产品),卵磷脂(中1.7采样及非特异性免