体外药动模型中诺氟沙星对嗜水气单胞菌.pdf

第25卷第3期
大连海洋大学学报
Vol 25 No.3
2010年6月
JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY
Jun、2010
文章号:1000-9957(2010)03-0219-05
体外药动模型中诺氟沙星对嗜水气单胞菌
的药动及药效研究
陈俭清2,卢形岩13
(1,中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室,江苏无钙214081;2.东北农
业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;3,中国水产科学研究院器龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070)
摘要:通过建立体外药动模型的方法,研究诺氧沙星对嗜水气单胞菌 Aeromonas hydrophil的药动一药效
(简称PK-PD)参数。结果表明:在消除半衰期为3.4h的模型内,2MIC(最小抑菌浓度)、4MIC和
8MIC的诺氛沙星对嗜水气单胞菌能够抑制4h,4h后细菌出现再生长,而16MIC的诺氟沙星对嗜水气单
胞菌能够起到持续的抑制作用;在消除半衰期为77h的模型内,2MC的诺氯沙星对嗜水气单胞菌能够抑
制4h,4h后细菌出现再生长,而4MIC、8MC和16MIC对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。消除
半衰期为3.4h的模型内,当AUCo_/MIC(药时曲线下面积与最小抑菌浓度的比值)>42.43±9.21,
C。/MIC(峰浓度与最小抑菌浓度的比值)>15.78±0.22时,诺氯沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的
抑制作用;消除半衰期为77b的模型内,当 AUC/MIC>41.8710.16,C/MIC>4.79±0.11时,诺
氯沙星对嗜水气单胞菌能够起到持续的抑制作用。
关键鍵词:体外药动模型;诺氯沙星;嗜水气单胞菌
中图分类号:S941.413
文献标志码:A
诺氟沙星( norfloxacin)又名氟哌酸,是第三
类唯诺嗣类药物,目前己被广泛应用于水产动物细1材料与方法
菌性疾病的防治上。由于诺氟沙星在水产领域
中的长期使用,使环境中对该药的耐药细菌越来越
1.1材料
多。目前已经证明细菌受染色体DNA或细胞质1.1.1菌株试验用菌株嗜水气单胞菌 ATCC
DNA控制的耐药性可以通过转导、转化、结合等7966,购自中国科学院微生物研究所。
方式从一个病原传递给其他病原体,这就使水产细1.1.2药品诺氟沙星标准品购自中国兽医药品
茵耐药性通过水产食品动物向人类传播成为可监察所(质量分数为99.5%);烟酸诺氟沙星为河
能
细菌耐药性的产生,很可能是原用药理论南汇杰科创动物药业公司生产(质量分数≥
的理念所导致的。在原有用药理论的指导下,易使98%)。
致病菌长期暴露在亚致死浓度下,因而产生耐药1.1.3仪器主要仪器有 Waters高效液相色谱仪
性。药动同步模型模拟了致病菌与体内变化的药物(HPLC)、 SANYO恒温培养箱和蠕动泵(保定兰
浓度的作用规律,能准确地反映病原菌、宿主和抗格恒流泵有限公司生产)。
菌药物三者的真实情况。
1.1.4培养基液体培养基为普通蛋白胨水,固
本试验中,作者采用建立体外药动模型的方体培养基为普通琼脂培养基。
法,研究诺氟沙星对嗜水气单胞菌 Aeromonas)1.1方法
drophila的药动一药效(简称PK-PD)参数,以
期为新的用药方案提供一些参考资料。
1.2.1最小抑菌浓度和最小杀茵浓度的测定采
收稿日期:2009-08-27
甚金项目:农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室基金资助项目(BM2007-12);“十一五”国家科技支撑计划项目
2006BAD03B04);农业公益性行业专项(20803013)
作者简介:陈俭清(1982-),男,硕土研究生。E- mail: chenjianqing193@163.coum
通信作者:卢形岩(1967-),女,副研究员。E-mal: longyan@ hotmail com
万方数据
220
大连海洋大学学报
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用改进的试管二倍稀释法测定[。先将药物配制1.2.4消除半衰期()及効泵流遠的确定
成128ug/mL,使用时先稀释10倍,再加人第
试验鲤体重为(90.34±26.12)g,采用肌注和
管,其他操作程序不变。嗜水气单胞菌菌悬液浓度口灌诺氡沙星后,いッ分别为3.4h和77h』。
为1x10CFU/mL。培养24h后,以能抑制细菌生动泵的流速根据药物在鲤体内的ら12来确定
长的最小药物浓度为最小抑菌浓度(MC)。培养
流速=Vxk
48h后,从观察药物浓度为MC以上未见细菌生其中:V为容器体积;k为消除速率常数,k
长的各试管培养物中,分别吸取0.1mL接种到普0.693/1so
通琼脂平板上,置于培养箱(30℃)中培养12h,1.2.5诺沙星的测定准确吸取1mL试样置于
计数少于5个菌落者,作为该药物的最小杀菌浓度45mL离心管中,加入10mL提取液(乙腈与体积
(MBC)。相同过程重复3次。
分数为50%盐酸的体积比为2500:20),旋涡混匀
1.2.2细菌计数以0.85%无菌生理盐水作为细2min,再加入10mL正己烷旋涡混匀2min,倒入
菌计数的稀释液,对茵液进行1:10°~1:10°系列125mL分液漏斗中,取下层于旋转蒸发瓶中,在
稀释,取0.1mL置于普通琼脂平板上,每个稀释55℃下旋转蒸干,用1mL流动相溶解,经微孔滤
度重复3块平板,置于培养箱(30℃)中培养12膜孔径为0.45pm的一次性针式滤器过滤,在
h,对菌数为30~300的平板进行菌落计数,取其HPIC仪上测定。
平均值。
1.2.6标准曲线及色请条件标准曲线为
1.2.3体外模型用参考文献[5-6]中的方
A=1.656292x10'X+(-104272),
法。在一个1000mL的密闭容器中装入600mL的
R2=0.99915
蛋白胨水,试验期间在该容器内用磁力搅拌器持续
色谱柱采用反相色谱柱( Eclipse XDB-C18),
搅拌,以免细菌沉积于容器底部。该容器即相当于柱高为150mmx4.6mmx5um,流速为1.5
药物动力学理论上的一个室。药物浓度的减少通过mL/min,激发波长为280m,发射波长为450
两个流速相同的动泵来完成,其中一个蠕动泵向nm,柱温为40℃,进样量为20u正L。流动相为
密闭容器内泵入灭菌的蛋白胨水,另一个端动泵从0.01mo/L.四丁基溴化铵,用磷酸调pH为3。
出容器外,在泵出液体培养基的动泵软管前端加13数据处理
一个经改造的直径为5cm的可换膜滤器,滤器内
药动一药效模型中的药物浓度一时间数据用
采用0.22um的微孔滤膜。
3P97药物动力学分析软件计算。根据两个邻近样
模型内嗜水气单胞菌的生长曲线将模型的密品点所围成的梯形面积之和计算杀菌动力学曲线下
闭容器放入培养箱(30℃)中预温。试验时,首面积(4い)。
先将密闭容器放置在磁力搅拌器的加温装置上,使
密闭容器的温度始终保持在30℃。然后,将动2结果
泵的频率调至所需的数值,并运行稳定,暂停。取
6mL处于对数生长期的菌液加入到容器中,运行2.1诺氯沙星对暗水气单胞菌的最小抑菌浓度和
蠕动泵,此时即为药动模型的0时。分别于0、
最小杀菌浓度
0.5、1