NYT 1756-2012 饲料中孔雀石绿的测定.pdf

ICS65.120
B46
NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1756-2012
代替NY/T1756-2009
饲料中孔雀石绿的测定
Determination of malachite green in feeds
2012-12-24发布
2013-03-01实施
中华人民共和国校业部发布
Y/T1756-2012
前言
本标准按照GB/T1.1给出的规则起草
本标准代替NY/T1756-2009《饲料中孔雀石绿的测定》。
本标准与NY/T1756-2009的主要差异如下:
在适用范围中增加了“植物性饲料原料”和“精料补充料”;
液相色谱一串联质谱部分增加了进样前离心步骤
标准对6.2.12溶液浓度做了详细说明。
本标准由农业部畜牧业司提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会( SAC/TC76)归口
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所「国家饲料质量监督检验中心
(北京)]、浙江省饲料监察所。
本标准主要起草人:李兰、索德成、贾铮、应永飞、杨曙明、朱聪英、赵根龙、魏书林、肖志明、杜洪鸽、
孙志文、符金华。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为
NY/T1756-2009
NY/T1756-2012
饲料中孔雀石绿的测定
1范围
本标准规定了用液相色谱仪和液相色谱一串联质谱仪測定饲料中的孔雀石绿及其同系物无色孔雀
石绿含量的方法。
本标准分为高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法,高效液相色谱一串联质谱法为确证法。
本标准高效液相色谱法适用于鱼粉、配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、精料补充料中孔雀石
绿和无色孔雀石绿含量的测定;高效液相色谱一串联质谱法适用于鱼粉、植物性饲料原料、配合饲料、浓
缩饲料、添加剂预混合饲料、精料补充料中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量的测定。
液相色谱法测定孔雀石绿和无色孔雀石绿的定量限均为10g/kg;液相色谱一串联质谱法测定孔
雀石绿和无色孔雀石绿的定量限均为1.0g/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3采样
按GB/T14699.1的规定执行。
4试样的制备
选取有代表性饲料样品,按GB/T20195制备样品,过0.425mm(40目)孔筛
5液相色谱法
5.1原理
以乙腈一乙酸钠缓冲溶液提取样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿,提取液经过二氯甲烷液液萃取
再经固相萃取柱浄化,用接有二氧化铅柱的氯基柱进行高效液相色谱分离,紫外可见光检测器检测,外
标法定量。
5.2试剂
除非另有规定,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水。
5.2.1乙腈:色谱纯。
5.2.2二氯甲烷。
5.2.3盐酸羟胺溶液:称取12.5g盐酸羟胺溶于50mL水中。
5.2.4盐酸羟胺甲醇溶液:取1mL.盐酸羟胺溶液(5.2.3)加甲醇定容至100mL。
5.2.5乙酸钠缓冲溶液:称取4.95g无水乙酸钠和0.95g对甲苯磺酸于900mL水中,用冰乙酸调节
pH4.5,用水定容至1000mL。
5.2.61.0mol/L.对甲苯磺酸溶液:称取17.2g对甲苯磺酸,加水溶解并定容至100mL。
NY/T1756-2012
5.2.7中性氧化铝,粒度为0.071mm~0.1501mm,层析用。
5.2.8乙脂一乙酸钠缓冲溶液:乙+乙酸钠缓沖溶液(5.2.5)=60+40。
5.2.9氯化钠溶液:称取25g氯化钠,加水溶解并定容至500mI
5.2.10孔雀石绿标准贮备溶液:精确称取孔雀石绿标准品(纯度≥95%)0.1000g,用乙腈(5.2.1)溶
解并定容至100mL。该溶液中孔雀石绿的浓度为1mg/mL,于-18℃保存可使用3个月
5.2.11无色孔雀石绿标准贮备溶液:精确称取无色孔雀石绿(纯度≥95%)0.1000g,用乙腈(5.2.1)
溶解并定容至100mL。该溶液中无色孔雀石绿浓度为1mg/mL,于-18℃保存可使用3个月。
5.2.12孔雀石绿和无色孔雀石绿混合中间液:精确移取孔雀石绿标准贮备溶液(5.2.10)和无色孔雀
石绿标准贮备溶液(5.2.11)各mL,置于50mL棕色容量瓶中,用乙脂定容至刻度。该溶液中孔雀石
绿和无色孔盆石均为194mデ2で~や銀存巴明で月
5.2.13孔雀石绿和无色孔石終标位工作液構确移银心石和无色孔雀石绿混合中间液
中孔雀石绿和无色孔雀矿绿均妙10mmL,现用现配
5.3仪器与设备
5.3.1高效液相色语配紫外可见光测器
5.32电子天平:名の9、感og
5.3.3离心机
5.3.4振荡器
5.3.5旋转蒸发器可控温25℃40
0m0m2工
(5.2.12)各1mL,置手100mL絶容量瓶中,用乙時一乙酸純缓河液(、2.8)定容至刻度。该溶液
5.3.6中性氧化铝B:Fg/6ml
3.7丙基黄酸阳崎脂PRS( proprylsulfonic acid柱:500mg/3miL
54分析步
5.4.1提取
称取试样约5(确0.0チ10のm心中、依次加入示端酸条取溶液6.2.
2mL对甲苯横溶液くム、6L钟実冲溶液で6。の和のL乙人约2g中性氧化铝
(5:2,振2iaすいm、のr/m品离mェ。将上清液转移アるm分液漏斗中,向离
心管中再次加入2ロン放、向ioて将いn合プ笑分放福斗?
5.4.2液液萃取
加入50nL氯化钠波て2)m、甲始22旋,静置分层.用蒸发瓶收集下层液
体后,在分液漏斗再次加入20m二氯申烷。旋播,静置分层,收集下层液体于同一蒸发瓶。将收集液在
85℃下减压旋转蒸发(注意:开始时温度不要直接升到35℃,以免种料损失)至近干,加人5mL乙腊脂溶
解残渣,备用。
4.3固相萃取净化
将中性氧化铝柱(5.3.6)串接在PRS柱(5.3.7上方,使用前用5mL乙腈预洗两柱。将5.4.2的
样液缓慢转移到中性氧化铝柱内,在抽真空情况下过柱(保持流速1mL/min)。再用5mL乙腈洗涤蒸
发瓶2次,洗涤液均转移至柱内,最后用5ml.乙腊洗涤小柱
弃去中性氧化铝柱,用乙脂一乙酸钠缓冲溶液(5.2.8)2mL、盐酸羟胺甲醇溶液(5.2.4)1mL洗脱,
收集洗脱液,过0.45m微孔滤膜上机测定
5.4.4测定
5.4.4.1液相色谱参考条件
色谱柱:氰基柱,柱长250mm,内径4.6mm;柱后串接氧化铅柱,柱长35mm,内径4.
mimo