NYT 1756-2009 饲料中孔雀石绿的测定.pdf

ICS65.120
B46
中华人民共和国农业行业标准
NY/"T1756-2009
饲料中孔雀石绿的测定
Determination of malachite green in feeds
2009-04-23发布
2009-05-20实施
中华人民共和国农业部发布
Y/T17562009
前
本标准附录A为资料性附录
本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提fr“。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量嗌督检验中心
(北京)」、浙江省饲料隘察所。
本标准主要起草人:李兰、萦德成、应永飞、闫惠文、杨曙明、朱聪英、杜洪鸽、谭旭信。
NY/T17562009
饲料中孔雀石绿的测定
范围
本标准规定了川液相色谱仪和液相色谱一串联质谱仪测定饲料中的孔雀石绿及其同系物无色孔雀
石绿含量的方法。
本标准分为高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法,高效液相色谱一串联质谱法为确证法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、鱼粉中孔雀石绿和无色孔雀石绿含量的
测定。
液相色谱法孔雀石绿和尤色孔雀石绿的定量限均为10pg/kg:液相色谱一串联质谱法的定量限均为
1.0?g/kg
2规范性引用文件
列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改単(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡儿是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3采样
按GB/T14699.1执行。
4试样的制备
选取有代表性饲料样品,按GB/T20195制备样品,过0.,28mm孔筛。
5液相色谱法
5.1原理
以乙腈-乙酸钠缓冲溶液提取样品中的孔雀石绿和无色孔雀石绿,提取液经过二氯甲烷液液翠取
再经固相萃取柱浄化,用接有二氧化铅柱的氯基柱进行高效液相色谱分离,紫外叮见光检测器检测,外
标法定量
5.2试剂
除非另有规定,在分析中仪使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水
5.2.1孔雀石绿草酸盐标准品:纯度≥95%。
5.2.2无色孔雀石绿标准品:纯度≥95%。
5.2.3乙腈:色谱纯。
5.2.4二氯甲烷。
5.2.5盐酸羟胺溶液:称収12.5g盐酸羟胺溶于50mL水中
5.2.6乙酸钠缓冲溶液:称取4.95g尤水乙酸钠和0.958对甲苯磺酸丁900mL水中,用冰乙酸调节
pH4.5,川水定容个1000mL。
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5.2.71.0mol/L对甲苯碱酸溶液:称取17.2g对苯磺酸,加水溶解并定容全100mLo。
5.2.8酸性氧化铝,粒度为0.071m~0.150lm,层析用。
5.2.9乙腈乙酸缓神溶液:乙腈十乙酸钠=60+40(v+v
5.2.10氯化钊溶液:称取25g氯化钊,加水溶解并定容至500mL。
5.2.11孔雀石绿标准贮备溶液:精确称取孔雀石绿草酸盐(5.2.1)0.1000g,用乙腈溶解,定容?100
mI。该溶液中孔雀石绿的浓度为1mg/mL,于-18℃保存可使用3个月。
5.2.12无色孔雀石绿标准贮备溶液:精硏称取无色孔石绿(5.2.2)0.10008,用乙腈溶解,定容个
100mL,该溶液中色孔雀石绿浓度为1mg/mL,于ー18℃保存可使用3个月。
5.2.13孔雀石绿和尤色孔雀石绿混合中间液:精确移取孔雀石绿标准贮各溶液5.2.11)和尢色孔雀
石绿标准贮备溶液(5.2.12)各0.5mL,置丁50mlL棕色容量瓶中,用乙腈定谷全刻度。该溶液中孔徐
石绿和无色孔雀石绿均为10ug/mL,于2℃~8℃保存可使用1个月
5.2.14孔雀石绿和无色孔雀石绿标准工作液:精确移取孔雀石绿和无色孔雀石绿混合中液
5.2.13)1mL,置于100mL棕色容量瓶中,川乙腈乙酸钠缓冲溶液5.2.9)定容不刻度。该溶液中孔
雀石绿和无色孔雀石绿均为100ng/mL,于分析前配制使用。
5.2.15盐酸羟胶甲醇溶液:取1mL盐酸羟胺溶液(5.2.4),加甲醇定容至100mL
5.3仪器
5.3.1高效液相色谱仪:配紫外可见光检测器
5.3.2电子天平:感量0.0001g、感量0.001g。
5.3.3离心机,转速4000r/min。
5.3.4振荡器。
5.3.5旋转蒸发器,可控温25℃~40C。
5.3.6固相萃取杜:丙基磺酸阳离子树脂PRS( propylsulfonic acid)柱:200mg/5mL~500mg/5mL
中性氧化铝柱:500mg/6mlL~1000mg/6mL。
5.3.7色谱柱:氰基柱(粒度为5m),柱长250mm、内径4.6mm。
5.3.8二氧化铅柱:柱长35mm、内径4.6mm
5.4分析步骤
5.4.1提取
称取饲料样品约5g(精确到0.001g),置于100mL离心管中,依次加入1.5mL盐酸羟胺溶液
(.2.5)、2mL对甲苯磺酸溶液(5.2.7)、5mL乙酸钠缓冲浴液(5.2.6和20mL乙腈,加入约2g酸性
氧化铝(5.2.8),振荡2min,超声30min,4000r/min离心5min。将上清液转移至250mL分液斗
中,向离心管中冉次加入20mL乙腈,振摇2min,4000r/min离心5min,合并上清液至分液漏斗中。
5.4.2液液萃取
加入50mL氯化创溶液(5.2.10)、50mL二氯甲烷(5.2.4),旋場,静置分层。用蒸发瓶收集下层液
体后,在分液漏斗再次加入20mL二氯甲烷,旋摇,静置分层,收集下层液体于同一蒸发瓶。将收集液在
35℃下减炷旋转蒸发(注意:开始时温度不要直接升到35℃,以免爆沸)不近,加入5mL乙腈溶解线
渣,备用。
5.4.3净化
固相苯取柱的活化
按中性氧化铝柱在上.、PRS柱在下的顺序将岗柱串联,使用前用5mL乙腈预洗炳杜。
5.4.3.2上样
将5.4.2的样液缓慢转移到中性氧化铝柱内,在抽真空情况下过柱(保持流速1mL/min)。再用5