天然矿泉水微生物检测方法.pdf

echnology
科技
分析与检测
目前,市面上销售的天然矿泉水应注意的是,在每一次试验时,都应物的含量。
品种繁多,但品质参差不齐,很多所做1组半行接种试验,并用一个只
传统的微牛物检测方法的最人优
谓的矿泉水并非取自地ド深层水源和含有营养琼指的平皿作为空山对照。勢布十测试成本较低,操作难度低。
山泉,而只是在地表水的基础上进行待培养基冷却凝固以后,翻转平皿,缺点在」测试周期长,作往需要3~
了加工,徴生物含量超标严重,长期地面朝上置」恒温培养箱中,温度控:dオ能形成?眼可见的菌落,而且对尢
饮用危害消费者健康。困此,天然和制在37C,维持48h后取出,统计涸环境的要求较为严格,测定结果受
泉水中微生物的検测是一重要的监总菌落数,通过计算可以得出1m培莽环境的影响较大。同时,传统的
测指标,它反峡出水体受微生物污染样品中微牛物的总数。
微生物检测方法只能检测活菌数量
的情況,关系泉水的水质能够达到多管发酵法
不能用于检测水体中总微牛物数量。
直接饮用的标准。传统的微牛物检测
多管发酵法检测通常情況下是在总体米说,传统的微牛物俭测方法的
方法检测周期长,精度不高,难以满锥形瓶中进行,主要实验过稞包折初检测结果淮确性不高
足现代企业和质量檢测部门的要求。发隊、平板分离和复发酵过程。初发天然矿泉水微生物检测新技术
所以,有必要探究天然矿泉水微生物脖要求取用经过灭菌处埋的倍浓缩分子检测技术
检测新技术。
乳粘蛋白陈培莽液50ml,分装在两个
1聚合嗨链式反应技术(PCR)
矿泉水微生物检测采样要求大试管中,然后加入100mL天然矿泉针对目的基因设一对特异寡核
检测矿泉水中的微生物的要求采水。然后取10支经过火菌处理的试管,苷酸引物,反应体系中加人DNA聚合
集的水样具有一定的代表性,同时在在其中各加入5mL三倍浓缩乳糖貨白酶和4种dNTP,以日的基四为模板进
采样过程巾一定要保持尢菌环境,使陈培养液,并加入100m1待檢测样品。行A体外扩增的技术。由」反应多
用的容器也需要经过严格的灭菌操作,将上述大试管放置在温度为37C的恒次循环,所以能在短时间内扩增获得
并保证早水样运输和保存的过程中不温培莽环境中,培24h,最终通过大量目的基?。PCR及其衍生的多种方
受外界环境微生物的影响。水样运输计数的方式确定总菌群数
法已用于水体中微牛物的检测。虽然
过中建议使用棕色,避兔阳光直平板计数法
PCR检测方法应用很广,但该方法的缺
射。做好水样采集记录,重点记录水徴牛物平板计数法是食品检測和点是稳定性差,容易产牛非特异性产
样来源和采集吋间、保存条件等关键环境监测中常用的俭测活菌数量的方物。首先,由」DNa检测尢需使用活
参数。
法,主要分为涂布平板法和稀释平板细胞,无法区分死、活细胞,无法准
传统微生物检测方法
法。其主要原興为:将待测样品中的确判断微生物是个具有感染力。其次,
总菌计数法
微生物充分分故为单个细胞的样子,由于PCR反应灵敏,任何抑制剂都会
菌落总数的检测方法一般以平Ⅲ充分稀释过后,取一定量的样品涂于抑制PCR反应,任何污梁都会造成假
计数法测定。需要同水源水微生物总平板上,恒温培养一定时间,待微生阳性结果。
数检验。首先,应在尢菌条件下用火物充分繁魈形成肉眼可见的菌落,
2DNA心片检测技术
菌吸管暈取允分混合的水样1mI,算菌落个数,就能人体了解稀释样品
使用DNA芯片檢测水体中的微生物
并将其入灭菌的平m中,再倾入15中微生物的数量。其中的对应原埋是是近年来新兴的檢测技术。DN芯片是
mL左右已融化且已冷却?45C左右一个菌落对应一个微生物,最后根括将DA探針阵列用机械于段定位在硅
的営养琼脂,并立即将其充分摇匀。稀释倍数推算,得到待测样品中微牛基片者璃上,每个点在100~200
食品交仝导201/年2月
万数据
食品全导刊2017年2月下币文-20170406.ind64
分析与检测
tm,相距200~500m。每个单点
种类较多的情ド,建议仗用陈瑶等
都含有一个募核苷酸,寡核苷酸片段
人发明的交工式目标提取技术。(3
能够与待测样品中的微生物杂交,然
目标微生物特征优化技术。在该步骤
后通过观察标记物或者戈光组分的最
卞要使用模拟退火算法和遗传算法。
终反映结果。该方法的一大优势在于
研究表明,微生物图像中面积、复杂
能够在短时间内完成大量样品的检测。
度?周长三个特征公数的测试精确度
心片检测使用的DNA片段具有特异性,
最高,同时也以结合其他参数修
可以完成多和不同微生物的检测,检
现阶段,该技术尚处」理论研究阶段
測效率高是该方法的最大优势。根据
相关测试仪器处丁研发调试阶段。
芯片的不同,该方法又细分为固定募
ATP生物发光法
核苷酸探钋芯片和PCR扩胺两大类。
ATP生物发光法的检测利用了一切
现阶段,使用最广泛的?种探针分子
是165RNA和23SRNA两种,在菌株
兴、レ天
活体微牛物体内都存在ATP,死·的微
生物体内的P迅速被分解,同时对
的鉴定中具有较高的检测准确度
」处」正常生理問期内的活体微生物
3RPA技术
其体内的P含量相对恒定,这就构
RPA技术的最大缺点是无法区分部
成了ATP含量和生物浓度的线性关系。
分死细菌和自山DぶA分析,经常出现
具休应用中,ATP檢测通过光索酶和
假性阳性。目前,应用较广的是通过
Mg作用之下会被P的腺苷酶活化,
嵌人剂在无活性细胞内降低PCR的牛
最终形成含有荧光素的MP复合体
物活性。微牛物rRNA前体是对该方法
可时放出焦僯酸。产牛的AMP复合体
的改进,与传统的方法相比,该技术
容易被氧分子氧化,导致其中的荧光
能够从无活性的细胞中区分出活菌。
口廖佳佳广东省湛江市食品药品检验所
微生物检测方法
素被激发,在电化学反映下发出氧
PCR技术巾经常出现的假性阳性现象得
化碳和水,光素从激发疮回到基
到控制,同时该方法也能在一定程度
的过程中发出光。根据发光强度和4TP
上避免检测过程中引入其他DN出导致
浓度的线性关系,就能较为方便的检
试样污染。
测出待测液中的ATP含量,并经由ATP
微生物图像检测技术
含量推算出徴生物的含量。该方法测
生物图像檢测技术釆用了数字
试时?短,测试效率高,同吋具有较
化于段处埋图像,通过对微生物显微
高的测试准确度。
图像的预处聞、特征值设定、目标提
収和分类处理艺,最终实现?矿泉
Q结语
传统的检测方法具有测定结果不
水中微牛物的分类计数。在这一技术
准确、操作周期长等弊端。因此,质
中主要有3个关键技术。(1)微牛物
量检测部」设矿泉水牛产企业相继研
图像的预处理。主要采用了图像灰度
发出了新型的做生物检测技术,本文
调节、灰度修正、图像淑处理和数
重要讨分子检测技术、微生物图像
学形描述和提取等技术。(2)目标
测技术和AP生物发光法检测做生
?像的提取1作。现阶段,常用的目