茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨.pdf

017年第1期
食品工程
3月出版
FOOD ENGINDERING
茚三酮显色分光光度法刘定食品中-氨基酸含量的方法探讨
Determination of alpha amino acid in food by ninhydrin color spectrophotometry
丁永霞
(菏泽市疾病预防控制中心,山东菏泽274010)
DING Yongxia
(Heze city center for disease control and prevention, Shandong Heze 274010, China)
摘要采用茚三酮显色分光光度法测定食品中?-基酸的总含量,通过试验摸索,确定了以甘氯酸为
标准品、茚三酮为显色的测定方法。試验结果表明,该方法的最佳反应条件为:pH值5.5,在沸水渗中
加热显色20min,常温条件下的最大吸收波长566nm。用甘氪酸配制系列标准溶液,通过标准曲线法对待
测溶液进行定量分析,其相关系数为0.9995,回收率在95.5%~104.3%范圈内,表明该方法具有操作简便
結果准确、重现性良好的特点。
关键词茚三酮;分光光度法;Q-氨基酸;甘酸
was established. The results show that the optimum reaction conditions were 9 ine, ninhydrin as chromogenic agent
Abstract The method of determinate alpha amino acid in food on the basis of gly
5.5, in a boiling water bath heating
chromogenic 20 min, under the oi on of m pa te maximum absorption wavelength of 566 nm. Prepared
with glycine series of standard solution, standard curve method for guantitative analysis of the test solution, the
correlation coefficient is 0.999 5, the recovery rate from 95.5%to 104.3% range. The method is with simple operatio
accurate results and good reproducibility
Keywords ninhydrin; spectrophotometry; alpha amino acid; glycine
中图分类号:TS207.4
文献标识码:A
文章编号:1673-6044(2017)01-0055-03
DOI:10.39695issa-1673-6044.2017.01.016
1材料与方法
钠,分析纯;NaOH溶液,浓度1molL,分析纯;
酚酞指示剂。
1.1位器
乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH=-5.5):精确称取
UV-2550紫外可见分光光度计,日本岛津公55g乙酸钠( CI COONA·32の)于烧杯中,加入
司;FA2004N电子分析天平,上海精密科学仪器公150mL蒸馏水,用移液管移取2.50mL冰醋鵔,加
司;石英比色皿(1cm);玻璃比色皿;容量瓶;热溶解,冷却后转移到250mL容量瓶中,用馏水
移液管;吸管;蒸馏烧瓶;加热套;pH试纸
定容至刻度
1.2试剂
茚三酮乙二醇溶液(质量浓度3%):精确称取
盐酸溶液,浓度6mol/L,分析纯;甘氨酸,优3g水合茚三酮,加入50mL乙ニ醇,低温加热溶
级纯;茚三酮试剂、分析纯;乙酸,分析纯;乙酸解后,转移至100mL容量瓶中,用乙二醇定容至
丁永霞,女,1963年出生,199%年毕业于曲卓师范大学化学刻度,转移到试剂瓶后置于0℃~5℃冰箱中保存
系化学专业,副主任技师。
备用(临用时配)。
收日期:2016-12-10
甘氨酸标准储备液:准确称取0.1000g甘氨酸
万方数据
食品工程
2017年第1期
3月出版
标准品,加馏水溶解定容到100mL容量瓶中,摇2结果与讨论
匀,转移到玻璃试剂瓶后置于0℃~5℃冰箱中备
用,此溶液质量浓度为1000gmL
2.1最大吸收波长的选择
1.3样品处理与测定方法
用紫外分光光度计(1cm石英比色皿)对样品
1.3.1样品处理
显色溶液进行比色(范围190m~700nm),发现最
精确称取5g样品于蒸馏烧瓶中,加入30mL,高峰值在可见区566m处,换玻璃比色皿对溶液
6molL的盐酸溶液,在100℃的沸水浴中加热水进行验证(范围400m~700nm),最高峰值仍在
解10h。冷却后过滤,并用少量的水冲洗过速漏566mm处,故选取566nm为最大吸收波长。吸收
斗中的残渣,将溶液定容至100mL容量瓶中。取光谱见图1和图2
1.00mL样品溶液于烧杯中,加入20mL蒸馏水、2
.000
滴酚酞试剂,用1moL的Na溶液滴定,使其
0.748
pH值在5~7之间,记录所需NaOH溶液的体积。
取出100a样品溶液于50m答量瓶中,加人所
需体积的NaOH溶液,配置pH值在5~7之间的样
0.242
品稀释溶液,备测。
O.(I0
1.3.2测定方法
400
600700
分別吸取样品稀释液2.00mL和00gml,、
波长/nm
图1样品显色液紫外可见区光谱图
t0.0g/mL、25.0Ag/amL、50.0g/mL、75.0以g/mL的
1.000
甘氨酸系列标准溶液2.0mL置于20mL比色管中,
加人乙酸ー乙酸钠缓冲溶液(pH-5.5)5.0mL,充
0.755
分摇匀后,加2.0mL质量浓度3%的茚一.爾乙二醇
溶液,揺匀,于沸水浴中加热,颜色变化后计时0
20min,计时结束后取出试管,冷却至室温,倒人
比色皿中,以0.0gmL的甘氨酸溶液为参比,在0020
50
600
700
566nm波长处测定圾光度,并绘制标准曲线,计算
波长fmr
出样品含量,同时做试剂空白。样品及标准溶液的
图2样品显色液可见区光谱图
吸光度值见表1。
2.2加热时间的影响
表1样品及标准溶液的吸光度
取6.0mL质量浓度为100ug/mL的甘氮酸标准
类型
质量浓度
工作液于50mL比色管中,加人15.0mL乙酸-乙
吸光度
ug/ml
酸钠缓冲液(pH=5.5)和6.0mL质量浓度3%的茚
0.0
三酮乙二醇溶液,摇匀,于沸水浴中加热,当溶液
10.0
0.137
有颜色变化时开始计时,每过5min取出约5mL溶
甘氨酸标准溶液
25.0
0.346
液,冷却,测定其吸光度,结果见表2、图3。由
0.681
图3可知,加热20min时吸光度数值基本稳定,
75.0
1.021
因此选择20min时为最佳加热时间。