GBT5009.111-2003 谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定.pdf

ICS67、040
C53
翻
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.111~-2003
代替GB/T14929.5-1994
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
的测定
Determination of deoxynivalenol in cereal
and cereal products
2003-08-11发布
2004-01-01实施
中华人民共和卫生部
中国国家标准化管理委员会
发布
GB/T5009.111~-2003
前言
本标准代替GB/T14929.5-1994《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定方法
本标准与GB/T14929.5-1994相比主要修改如下
一修改了标准的中文名称,标准中文名称改为:《谷物及其制品中脱氧雪腐蠊刀菌烯醇的测定》;
按GB/T20001.4-20014《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行
了修改。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。
本标准起草单位:卫生部食品卫生监督检验所
本标准第一法主要起草人:魏润蕴。
本标准第二法主要起草人:阳传和、罗雪云、计融。
原标准于1994年首次发布,本次为第一次修订
GB/T5009.111-2003
谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀薗烯醇的测定
范围
本标准规定了谷物及其制品(蛋様、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON、呕吐毒素)的薄层
色谱测定方法及免疫测定方法( ELISA)。
本标准适用于谷物(小米、玉米、大麦等)及其制品(蛋糕、饼干、面包等)中脱氧雪腐镰刀菌烯醇
(DON、呕吐毒素)的测定。
本标准第一法检出限0.1mg/kg,第二法检出限为0.1ng/kg。
第一法层色谱测定法
2原理
谷物及其制品中的脱氧雪镰刀菌烯醇经提取、净化、浓缩和砡胶G薄层展开后,加热薄层板。由
于在制备薄层板时加入了三氯化铝,使脱氧雪腐镰刀烯醇在365nm紫外光灯下显蓝色荧光,与标准
比较。
3试剂
3.1三氯甲煷。
3.2元水乙醇。
甲醇
3.4石油藤60℃~90℃或30℃~60℃。
3.5乙酸乙酯。
3.6乙猜。
3.7丙酮。
3.8异丙醇。
3.9乙。
3.10无水乙醚。
3.11氯化铝(AICl2?6H2O):化学纯。
3.12中性氧化:层析用,经300℃活化4h,置干燥器中备用。
3.13活性炭:20g活性炭,用3mo!/L盐酸溶液浸泡过夜、抽滤后,用热蒸馏水洗至无氯离子,在
120℃烘于备用。
3.14硅胶G:薄戾层析用。
3.15脱氧雪腐镰刀菌烯醇(以下简称DON)标准溶液,精密称取,5.0 mg DON,加乙酸乙酯甲醇(19
+1)溶解。转人10mL容量瓶中,用乙酸乙酯甲醇(19+1)稀释至刻度,此标准溶液含DON.5mg/mle
吸取此标准溶液0.5mL,用乙酸乙酯甲醇(19+1)稀释至10mL,此溶液每毫升含DON25rg。
仪器
4.1小型粉碎机。
4.2电动振荡器。
4.375mL玻璃蒸发理。
GB/T5009.111-2003
4.4层析柱:内径2cm,长10cm,不具活塞。
4.510mL具塞浓缩瓶:底部具0.2mL刻度尾管
4.6玻璃板:5cm×20cm。
4.7薄层涂布器:0.3mm。
4.8展开槽:内长25cm,宽6cm,高4cm。
4.9紫外光灯:365nm。
4.10微量注射器:10gL,50gL。
4.1150mL平底管
4.12双波长薄层扫描仪:带数据处理机。
5分析步
5.1提取
称取20g粉碎试样置于200mL具塞雊瓶中,加8mL水和100mL三氯甲烷-无水乙醇(8+2),密
塞。在瓶塞上涂层水,盖严防漏,振荡1h,通过折叠快速定性滤纸过滤,取25mL滤液于75mL玻璃蒸
发皿中,置90℃水浴上通风挥干
5.2净化
5.2.1液-液分配
5.2.1.1谷物:用50mL石油分次溶解蒸发皿中的残渣,洗入100mL分液漏斗中,再用20mL(玉
米试样用30mL)甲醇-水(4+1)分次洗涤蒸发皿,转入同一分液漏斗中。
5.2.1.2谷物制品(蛋糕、饼干、面包等):用100mL石油醚分次溶解蒸发皿中的残渣,洗入250mL分
液漏斗中,再用30mL甲醇-水(4+1)分次洗涤蒸发皿,转人同一分液斗中。
振摇分液漏斗1.5min,静置约15min使分层后,将下层甲醇-水提取液过柱净化,不要将两相交界
处的白色絮状物放入柱内
5.2.2柱净化
5.2.2.1小麦及其制品:在层析柱下端与小管连结处塞约0.1g脱脂棉,尽量塞紧,先装人0.5g中性
氧化铝,敲平表面,再加0.4g活性炭;敲紧。将层析柱下端小管插入一橡皮塞,塞在抽滤瓶上,抽滤瓶
中放一平底管接受过柱液,将抽滤瓶接上水泵或真空泵,稍稍开启泵,使活性炭压紧,将分液漏斗中的甲
醇-水提取液小心地沿管壁加入柱内,控制流速为每15s18滴~20滴(3mL/min),甲醇-水提取液过柱
快完毕时,加入10mlL甲醇-水(4+1)淋洗柱,抽滤,直至柱内不再有液体流出。过柱速度控制在
2mL/min~3mL/min,速度太快净化效果不好,太慢耗时太长
5.2.2.2玉米:同5.2.2.1,只是将活性炭的用量改为0.3g。
5.3制备莓层层析用样液
将过柱后的洗脱液倒入75mL玻璃蒸发皿中,用少量甲醇-水(4+1)洗涤平底管。将蒸发皿置沸水
浴上浓缩至干。
5.3.1小麦:趁热加人3mL乙酸乙酯,加热至沸,在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次,使充分沸
腾将残渣中的DON溶出,并将乙酸乙酯挥发至干,再加入3mL乙酸乙酯同样处理一次,将溶剂挥干,
最后加3mL乙酸乙酯,加热至沸,放冷至室温后转入浓缩瓶中,再用三份1.5mL乙酸乙酯洗涤蒸发
皿,并入浓缩瓶中。
5.3.2小麦制品、玉米:趁热加入3mL乙酸乙酯,加热至沸,在水浴锅上轻轻地反复转动蒸发皿数次,
使充分沸腾,将残渣中DON溶出,放冷至室温后转入浓缩瓶中。加约0.5mL甲醇-丙酮(1+2)于蒸发
皿中,用玻棒搅动溶解残渣,将蒸发皿置水浴锅上挥干溶剂后,加入3mL乙酸乙酯,加热至沸,转动蒸
发皿,使充分沸腾,放冷至室温后转人同一浓缩瓶中,再用0.5mL甲醇丙酮(1+2)和3mL乙酸乙酯
同样处理一次,乙酸乙酯提取液并人浓缩瓶中
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