放线菌327 的摇瓶补料分批发酵研究.pdf

2012Vo?,31No.6
.122. Serial No 243
China Brewing
Research Report
放线菌327“的摇瓶补料分批发酵研究
赵子鹏',朱薇玲2*,王小琴,黄浩
(1.武汉工业学院生物与制药工程学院,湖北武汉430023;2.武汉工业学院省级生物学实验教学示范中心,湖北武汉430023)
摘要:为提高放线菌327发酵生产拮抗物质的产量,在摇瓶中采用补料分批发酵方式,考察了发酵过程中补加碳源和氮源对菌体
生产拮抗物质的影响。试验结果表明:在发酵36h补加0.5%大豆粉,48h补加1.5%葡萄糖,60h补加0.5%葡萄糖的补料方式获得了最佳
的补料分批发酵结果,拮抗物质产量最高,其产生的抑菌圈平均直径达(25.2±0.4mm,比对照(22.3t0.4)mm有显著的增加。
关键词:放线菌327;补料分批发酵;拮抗物质;摇瓶
中图分类号:93-335
文献标识码:A
文章编号:0254-5071(2012)06-0122-03
Fed-batch fermentation of actinomycete 327"in shake flasks
ZHAO Zipeng ZHU Weiling*, WANG Xiaoqin, HUANG Hao
(1. College of Biotechnology and hammacetical Engineering, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China
2. Hubei Experimental Teaching Demonstration Center of Biolog, Wuhan Polytechnic niversity, Wuhan 430023, China)
Abstract: To improve the eld of antagonist us anes produed by actom ete 3 e efects of carbon or nitrogen source feeding on the pro-
duction of antagonistic substances were investigated by fed-batch fermentation in shake flasks. The results indicated that feeding 0.5% soybean flour
at 36, 1. 5% glucose at 48h and 0. glucose at 6h during the fed-batch fermentation could significantly enhance the production of antagonist c
substances whose mean inition zone diameter reached(5.2 4)mm which was cany hr an ontrol(22.3*0.4)mm
Key words: actinomycete 327, fed-batch fermentation; antagonistic substances; shake flask
补料分批发酵,是指在分批发酵过程中间歇或连续地钙02%pH值为,0。发酵培养基:黄豆粉05%,硫酸铵1.5%,
补加新鲜培养基或某些营养物质的方法。其在徽生物发笛萄糖2.5%,氯化钠0.6%,碳酸钙0.6%,pH值为7.0
酵生产中已经得到广泛的应用,遍及氨基酸、抗生素、维生1.2培养条件和方法
素、酶制剂、单细胞蛋白、有机酸等的生产过程,显著提高
将放线菌327“菌种划线接种在高氏培养基斜面或平
了发酵产物的产量。研究结果表明,补料对微生物发酵板上,28℃培养4d~5d。挖取长有放线菌327培养物的琼
有几个基本作用:可控制抑制性底物的浓度,解除或减弱脂块约lem2接入装有25mL种子培养基的250mL三角瓶中,
分解产物的阻遏,优化发酵过程,使微生物保持在最大生200r/min、28℃摇床培养2d。然后,按8%接种量将种子液接
产力的状态。其作为一种发酵控制手段,对于发酵产物的入装有25mL发酵培养基的250mL三角瓶中,200min
获得具有十分重要的意义阿。
30℃摇床发酵3d,测定发酵滤液中拮抗物质含量。
试验所用放线菌327“对引起食用菌病害的木霉、青军1.3摇瓶补料分批发酵
及部分植物病原薗有较强的拮抗作用,其代谢产物具备显
根据实验方案在发酵过程中补加一定量的基质,葡萄
著的生防特性。为提高放线菌327的拮抗物质产量,试验糖和硫酸铵配制成0.5g/mL溶液灭菌作为补加基质,大豆
组前期对其发酵培养基和发酵条件进行了优化研究。本粉灭菌后干粉补加,对照为不补加任何基质。发酵结柬或
试验拟在此基础上,在摇瓶中采用补料分批发酵方式,考定时取样测定相关参数,测定结果为3个平行样的平均值。
察了发酵过程中补加碳源和氮源对菌体生产拮抗物质的1.4分析方法
影响。以期进一步提高放线菌327°的拮抗物质产量,为今
发酵液中拮抗物质的含量测定按文献?中方法测定。
后将其应用于食用菌或植物病害的生物防治打下基础。
还原糖浓度的测定采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS
1材料与方法
法)测定。
1.1菌株及培养基
2结果与讨论
菌株:放线菌327,从武汉市郊区棉花种植土壤中分2.1补料时间和补料基质种类的确定
离获得;检定菌为青霉菌,由武汉工业学院生物工程实验
单次补料(补加基质发酵液体积,gmL):分别向培养
室提供。
24h、36h和48h的发酵摇瓶中补加0.5%和1.0%的葡萄糖、
培养基:高氏培养基,马铃薯培养基(PDA)。种子培养硫酸铵和0.5%大豆粉,继续培养至72h结束发酵,测定发
基:黄豆粉2%,葡萄糖2%,硫酸铵0.5%,氯化钠08%,碳酸酵液中拮抗物质的含量,以初步确定补料时间和补料基质
收稿日期:2012-02-19
作者简介:赵子鹏(1992-),男,湖北汉川人,在读本科生,研究方向为微生物发酵;朱薇玲,高级实验师,通讯作者。
万方数据