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研究论文
微生物发酵制备莽草酸的含量测定
沈国鹏,李莉,班春兰,吴鸣建,黄强
(1、郑州大学化工与能源学院,南郑州450002;2.河南省化学学会,河南郑州45000
摘要:由于微生物发酵法合成莽草酸的研究尚处于实验室研究阶段,建立了微生物发酵制备莽
草酸含量的测定方法。采用紫外可见分光光度法对萃草酸产生菌发陈液中草酸进行测定。检
测波长245nm,莽草酸标准溶液线性方程为:A=3.0844C-0.0048,R-0.99。平均回收率为
100.04%,RSD为0.32%。方法简便、快速、准确,且稳定性好,适用于测定微生物发時生产莽草酸
的含量。
关鍵词:微生物发酵;莽草酸;紫外-可见分光光度法
中图分类号:0657.32文献标志码:A文章编号:1673-1689(2013)10-111-04
Determination of Shikimic Acid in the Production of Microbial Fermentation
SHEN Gu0-peng, L li', BA N Ch
WU Ming-jian, HUA NG Qiang
(1. School of Chemical Enginecring and Enery, hengzhou University, Zhen zhou 450002, ina: 2. Chemical
Society of Henan Province, Zhengzhou 450002, China)
Abstract: The method for determination of shikimic acid in the production of microbial
fermentation was established. Using ultraviolet-visible spectrophotometry for determination of
shikimic acid in the fermented liquid of shikimic acid producing bacteria. The detection wavelength
was 245 nm, Linear equation of shikimic aid standard solulion wasa=30844-0004(R=0.9
) The recovery was 96.7%103.7%o with average recovery of 100.04%, RS) was 0.32%0. The
lod is simple, fast, stable and accurate, and suitable to delermine the shikimic acid in the
production of microbial fermentation
Keywords: microbial fermentation, shikimic aid, ultraviolet-visible spectrophotometry
人禽流行性感冒一直严重危害着人类的健康,痛和抑制血栓形成的作用,其本身及其衍生物在抗
仪在美国每年因流感住院的患者达15万人田。截止癌和抗病毒方面也有一定的作用,可作为ー些化
2013年4月21日,中国全国人感染H7N9禽流感学合成制剂和药物中间体,尤其是抗禽流感疫苗达
确诊病例达104例,其中死亡21人阳。莽草酸(结构非的重要合成原料,在食品和化学工业中有着广泛
见图1)是化学合成中重要的化工原料,具有抗炎镇的应用。莽草酸存在于木兰科常绿灌木莽草的干
收稿日期:2013-05-14
作者简介:沈鹏(1962-),男,河南郑州人,副教授,硕士研究4导师,主要从事精细化工、有机合成等研究。
1@zzu.edu.cm
解23保R食品与生物技术学报2013年第32巻第I0期O图
万方数据
SHEN Guo-peng, et al: Determination of Shikimic Acid in the
Research Article
Production of Microbial Fermentation
燥果实八角中,除此之外,莽草酸还广泛存在于微
生物中。因此可以通过微生物发酵提取莽草酸P?,
2结果与分析
到目前为止,国外有两项通过大肠菌、枯草菌21校准曲线方程
生产莽草酸的专利川-叫。日前唯一可对流感治疗有
根据测定结果选x轴为莽草酸浓度,y轴为吸
效的药物达菲产量受限,全球供应吃紧,其主要原光度作图计算,回归线性方程为y=3.0844x-0.004
因之一是因为生产达非的原料莽草酸的短缺。
。相关系数;R2=0.9999(a=8)。检出限(按S/N=3
八角茴香中莽草酸含量的测定通常采用高效计)为0.0025mgmL,其线性池围为0-03mg/mL
液相色谱法,用该法测定八角提取物中莽草酸含表明在245m波长下,吸光度与莽草酸浓度有着
量时,需要使用大量的有机试剂,会给环境带来污显著的线性关系,可据此方程测定莽草酸(见图1)。
染以及对操作人员造成伤害。到目前为止,国际上
利用微生物发酵法合成莽草酸的研究尚处于实验
0.8
y=3.0844x-0.0048
室研究阶段,孙晓宇等?利用羟基苯甲醛比色法测
R2=0.9999
定了莽草酸的含量。作者利用了紫外-可见分光光
系列1
0.2
一线性(系列1)
度法测定了发酵液中莽草酸的含量,为生物发酵生
0,050.100,150.200.250.30
产莽草酸的研究提供了便捷可靠的分析方法
质量浓度C(mg/ml
1材料与方法
图1莽草酸的线性回归图
Fig 1 Linear regression graph of shikimic acid
1.1材料与位器
2方法考察
莽草酸标准品;实验用水为去离子水;莽草酸2.2.1精密度及准确度实验准确移取供试品溶
产生菌菌种自选;发酵培养基:自制
液进行稍密度测定,测得值为0.0972、0.0975、
TC-16型高速离心机:巩义市予华仪器有限0.079、0.0972.0.0972,0.0969、0,0972mgmL
任公司产品;WS70-1型红外快速干燥箱:巩义市英相对标准偏差RSD为0.32%(n=7),表明具有较高
峪予华仪器厂产品;FA2004型电子分析天平:上海
精密度,相对误差为0.10%,表明具有较高的准确
恒平科学仪器有限公司产品; WFZ UV-2102PC型紫
度
外可见分光光度计:尤尼柯上海仪器有限公可产品。
2.2.2稳定性实验取发酵处理液,室温下放置0
1.2实验方法
4,8、12、24、48h后进行测定,测得值为(0.1040、
12.1样品前处理取50mL莽草酸产牛图发隊0.1037,0.1034,0.027、0102101011mgm
液用离心机以12000 r/min转速离心20min,收集
相对标准偏差RSD为1.06%,表明供试溶液室温放
上清液,于245mm测定吸光度。
置48h内稳定
2.2对照品与供试品落液的配制对照品溶液2,23加标收率实验加标回收率是分析人员
雅确称取红外烘干至恒重的莽草酸标准品0.5038在样品测定时主要的质量控制方法。其大小不仅反
g,浴于蒸馏水中,然后定容至100nl,再从中収1