NYT 1970-2010 饲料中伏马毒素的测定.pdf

ICS65.120
B46
NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定
Determination of fumonsins in feeds
2010-12-23发布
2011-02-01实施
中华人民共和国农业部
发布
NY/T1970-2010
前言
本标准遵照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准包括两个方法:液相色谱串联质谙法和液相色谐法;其中,液相色谱串咲质谱法为仲裁法,
本标准由中华人民共和国农业部畜牧业可提出。
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归ロ。
本标准起革单位:农业部农产品质量安全监督检验测试中心(宁波)。
本标准主要起草人:吴银良、皇甫伟国、杨挺、孙亚米、王立君、赵健、朱勇、陈国、昌燕
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定
1范围
本标准规定了饲料中伏马毒素B1和伏马毒素B2含量的液相色谱串联质谐测定方法和液相色谱测
定方法。
本标准适用于植物源性饲料原料、精料补充料、配合饲料和浓缩饲料中伏马毒素B1和伏马毒素B2
含量的测定。
不标准的方法检出限和定量限:液相色谱串联质谱法的检出限为0.01mg/kg,定量限为0,.05ng
kg;液相色普法的检出限为0.01mg/kg,定量限为0.05mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修政单)适用于本文件。
GB/T682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
3试样制备
按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品,按GB/T20195用四分法缩减至500g,粉碎后
0.45mm孔径的分析筛,混匀后装入密闭容器。
液相色谱串联质谱法(仲裁法
4.1原理
试样中伏马毒素B2和伏马毒素B2用甲醇溶液提取,提取液经强阴离子固相萃取小柱净化后,用液
相色谱一串联质谱仪测定,采用色谱保留肘间和质谱碎片离子丰度比定性,基质校准外标法定量
4.2试剂和材料
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。
4.2.1甲醇:色谱纯。
4.2.2甲酸:色谱纯。
4.2.3乙酸:优级纯
4.2.4氢氧化钠溶液(0.2mol/I):淮确称取4g氢氧化钠于烧杯中,加适量水溶解后,移人0.5L容量
瓶中,加水定容至刻度
4.2.5盐酸溶液(0.2mol/I):准确移取18mL盐酸于1L容量瓶中,加水定容至刻度,混匀后备用
4.2.6乙酸甲醇(1%):雅确移取10mL乙酸于1L容量施中,加甲醇定容至対度,混匀后备用。
4.2.7甲酸甲醇溶液(0.1%):准确移取1mL甲酸于1L容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀后备用
4.2.8甲酸溶液(0.1%):確确移取1mL甲酸于1L.容量瓶中,用水定容至刻度,混匀后备用。
4.2.9甲醇溶液(75%):取甲醇750mL加水250mL,混匀后备用。
4.2.10伏马毒素B2,纯度≥95.0%
4.2.11伏马毒素B2,纯度≥97.0%
NY/T1970-2010
4.2.12伏马毒素标准储备液:分别准确称取适量伏马毒素B2和伏马毒素B标准品,用甲醇溶液
(4.2.9)溶解并定容至10mL,配制成200mog/L.的标准储备液,-18℃冰箱中保存,有效期6个月。
4.2.13混合标准储备波:取伕马毒素B和伏马毒素B2标准储备液(4.2.12)以1:1比例混合,得混
合标准储备液,浓度为100mg/L,-18℃冰箱中保存,有效期6个月。
4.2.14混合标准中液:准确移取10mL混合标准锗备液(4.2.13)于100mL容量瓶中,用甲醇溶液
(4.2.9)定容至刻度,浓度为10mg/L,-18℃冰箱中保存,有效期3个月
2.15强阴离子交换固相萃取柱:500mg,3mL。使用前依次用5mlL甲醇、5mL甲醇溶液(4.2-9)
活化。
4.2.16空白试料:含伏马毒素B和伏马毒素B均小于0.05mg/kg的植物源性何料原料;含伏马毒
素B和伏马毒素B2均小于0.25mg/kg的精料补充料、配合饲料和浓缩饲料。
仪器和设备
4.3.1液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源。
4.3.2离心机:最大转速5000r/min或以上。
4.3.3分析天平:感量0.01mgo
4.3.4天平:感量0.01g。
4.3.5超声波清洗器
4.3.6氮吹仪
4.3.7固相萃取装置
4.3.8涡旋混合器
4.3.9pH计
4.3.10匀质器.
4.4分析步骤
4.4.1提取
称取2g试样(精确到0.01g)于50mL离心管中,加入10mL甲醇溶液(4.2.9),渴旋1min,然后
超声提取5min,以5000r/min的速度离心2mnin,移取上清液后同样步骤提取一次,合并上清液。用氢
氧化钠溶液(2.2.4)或盐酸溶液(4.2.5)调节pH至5.8~6.5,待净化。
4.4.2净化
准确移取提取液(4.4.1)2mL至固相萃取小柱(4.2.15)中。依次用3mL甲醇溶液(4.2.9)、3mL
甲醇淋洗小柱,抽至近干后用10mL乙酸甲醇(4.2.6)洗脱。整个固相萃取过程流速控制在
1mL./min~2mL-/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物用1mL甲醇溶液(4.2.9)溶解,过0.22
pm滤后进行液相色谱串联质谱分析
4.4.3基质校准标准样品的制备
有空自试料时,分别准确移取伏马素混合标准中间液(4.2.14适量,植物源性饲料原料测定时配
制浓度为0.015mg,/L、C.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L和2.0mg/L,其他饲料测定时
配制浓度为0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0ng/L.和10.0mg/L的系列标准溶液;収
空白试料,按4.4.1~4.4.2步骤处理,在洗脱液中分别加入各浓度标准溶液1.0mL,氮气吹干后用屮
醇溶液(4.2.9)溶解上机测定,以定量离子对峰面积为纵坐标,标准溶液淞度为横坐标,绘制基质校准标
准曲线。无法获得空白试料时,直接用测定样品经4.4.1~4.4.2步骤处理后洗脱液中加入1.0ml
5.0mg/L的标雅溶液作为基质校准标准样品,吹干后用甲蹲溶液(4.2.9)溶解上机测定。
4.4.4测定
4.4.4.1色谱参考条件