gb5750-2001 生活饮用水检验规范 (2001年修订版).pdf

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生活饮用水检验规范(GB5750-85修订版,卫生部2001.6)
35细菌总数
35.1平皿计数法
35.1.1范围
本规范规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的测定方法。
本规范适用于测定生活饮用水及其水源水中的细菌总数。
35.1.2原理
细菌总数是指水样在一定条件下培养后(培养基成分,培养温度和时间、pH、需氧
性质等)所得1ml.水样所含菌落的总数。按本规范规定所得结果只包括一群能在营养
琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
35.1.3培养基与试剂
35.1.3.1营养琼脂
35.1.3.1.1成分:
A蛋白胨
10g
B牛肉膏
3g
C氯化钠
5 g
D琼脂
10~20g
E蒸馏水
1000mL
35.1.3.1.2制法:将上述成分混合后,加热溶解,调整pll为7.4~7.6,分装于玻璃容
器中(如用国产含杂质较多的琼脂时,应先过滤),经121℃灭菌20min,储存于冷暗处
备用
35.1.4仪器
35.1.4.1高压蒸汽灭菌器。
35.1.4.2千热灭菌箱。
35.1.4.3培养箱36±1℃
35.1.4.4电炉。
35.1.4.5天平。
35.1.4.6冰箱。
35.1.4.7放大镜或菌落计数器。
35.1.4.8pH计或精密pH试纸。
35.1.4.9灭菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶等。
35.1.5检验步骤
35.1.5.1生活饮用水
5.1.5.1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样,注入灭菌平皿中,倾
注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基,并立即旋摇平皿,使水样与
培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培
养基作为空白对照。
35.1.5.1.2待冷却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于361℃培养箱内培养24h,进
行菌落计数,即为水样ml中的细菌总数
35.1.5.2水源水
35.1.5.2.1以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样,注入盛有9mL灭菌生理盐水的
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试管中,混匀成1:10稀释液。
35.1.5.2.2吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100
稀释液。按同法依次稀释成1:1000,1:1000稀释液等备用如此递增稀释一次,必
须更换一支1mL灭菌吸管
35.1.5.2.3用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样1mL,分别注人灭菌平皿内。以下
操作同生活饮用水的检验步骤。
35.1.6菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下
各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时应用。在求同稀
释度的平均数时,若其中一个平皿有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片
状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余
一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数然后再求
该稀释度的平均菌落数。
35.1.7不同稀释度的选择及报告方法
35.1.7.1首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算,若只有一个稀释度的平均菌
落数符合此范围时,则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见实例1)
35.1.7.2若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视二者之比值来决定,
若其比值小于2应报告两者的平均数(如实例2)若大于2则报告其中稀释度较小的
菌落总数(如实例3)。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见实例4)
35.1.7.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以
稀释倍数报告之(见实例5)。
35.1.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以
稀释倍数报告之(见实例6)。
35.1.7.5若所有稀释度的平均茵落数均不在30~300之间,则应以最接近30或300的平
均菌落数乘以稀释倍数报告之,(见实例7)
35.1.7.6若所有稀释度的均无菌落生长,则以<1乘以稀释倍数报告之
35.1.7.7菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告,大于100时,采用二位有
效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零
数也可用10的指数来表示(见表35-1“报告方式”栏)。
表35-1稀释度选择及菌落总数报告方式
实例不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落总数
报告方式
10-
10-10菌落数之比(CFU/m)
(CFU/mL.)
1136516420
1640016000或1.6×104
276029546
1.6
37750
38000或3.8×104
2345678
289027160
2.2
2710027000或2.7×10
150308
2
15001500或1.5×103
5多不可计1650513
51300010000或5.1×105
27
11
5
270
270或2.7×102
7多不可计30512
30500
31000或3.1×10
0
0
0
1×10
×10
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36总大肠菌群
36.1多管发酵法
36.1.1范围
本规范规定了生活饮用水中及其水源水中总大肠菌群的多管发酵测定方法
本规范适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定
36.1.2原理
总大肠菌群系指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的
革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便,具有指示菌的一般特征,故以
此作为粪便污染指标评价饮水的卫生质量。
水中总大肠菌群数系以100mL水样中污染的总大肠菌群最可能数(MPN)表示
36.1.3培养基与试剂
36.1.3.1乳糖蛋白胨培养液
36.1.3.1.1成份
A蛋白胨
10g
B牛肉膏
3g
C乳糖
5g
D氯化钠
5 g
E溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)
mL
F蒸馏水
1000m
36.1.3.1.2制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,调整pH为7.2~7.4,再加入1m
溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L),充分混匀,分装于装有倒管的试管中,115℃高压灭菌
20min,储存于冷暗处备用。
36.1.3.2倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液(36.1.3.1)除蒸馏水外,其它成份量加倍
36.1.3.3伊红美蓝培养基
36.1.3.3.1成份
A蛋白胨