气相色谱内标法测定植物油中角鲨烯含量.pdf

2017年12月
中国粮油学报
Vol 32, No. 12
第32卷第12期
Journal of the Chinese Cereals and Oils Association
Dec.2017
气相色谱内标法测定植物油中角鲨烯含量
朱琳薛雅琳刘晓辉张东张东生
(国家粮食局科学研究院,北京100037
(普洱健源油脂有限公司,普洱665000
(江南大学,无锡214122)
摘要通过内标类型和用量的选择,在已有方法基础上建立了一种内标法测定植物油中角鲨烯含量的
气相色谱法方法。以角鲨烷为内标,样品经氢氧化钾-甲醇皂化,正己烷萃取,采用HP-5毛细管谱柱,程序
升温气相色谱条件。结果表明,角鲨烯的平均回收率为95.5%~103.0%,精密度为1.42%~5.89%,检出限
为0.05mg/kg。该方法不仅回收率高,重现性好,而且灵敏度高,该方法可用于測定植物油中角鲨烯含量,为
科学评价植物油中营养成分提供技术支撑。
关键词角鲨烯角鲨烷内标法植物油气相色谱法
中图分类号:TS25.1文献标识码:A文章编号:1003-0174(2017)12-0117-04
角鲨烯是一种高不饱和的天然萜类化合物,属脂杂质,但是仍有部分杂质会残留,残留下来的杂质
于脂质不皂化物,它最初是从鲨鱼的肝油中发现的
出峰时间较长,且使用SPF.进行前处理油脂样品上
1914年被命名为 Squalene,其化学名为(6F,10E,样量小,对于角鲨烯含暈较低的样品不适用,从目前
14E,18E)-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,的文献报道中看,也仅有角鲨烯含量较高的橄榄油
14,18,22-ニ十四碳六烯。它属于开链三萜,又称用SPE进行前处理,该法前处理检测成本较高不适
鱼肝油茜,也称鲨烯,具有提高体内超氧化物岐化酶合推广使用:由于角鲨烯属于脂质不皂化物,因此本
SOD)活性、增强机体免疫能力、防癌、防心血管疾研究在文献基础上选择不皂物提取经典的方法一
病、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能。因此,液液萃取法作为前处理方法。但不皂化物提取操作
被广泛应用于医药和化汝品等相关领域。
比较繁琐,难免会有所损失,而内标定量方法会减少
目前,国际AOAC( Revised1996)标准中有测定操作上的误差,提高方法的准确性。因此,本研究通
角鲨烯含量的方法,此方法通过不皂化物提取,柱过内标种类和用量的选择,选出一种适用于气相色
色谱分离,最后采用滴定方法对角鲨烯进行定量,检谱法定量角鲨烯的内标物质角鲨烷,建立一种以角
测过程较为繁琐,且最后采用滴定法测量,误差较鲨烷为内标测定植物油中的角鲨烯含量的气相色谱
大。文献报道植物油中角鲨烯含量测定的方法较法,该法不仅分离效果好、灵敏度高、回收率高且成
多,主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气质联用本低,适合植物油中角鲨烯含量测定方法推广使用。
法等-。从采用的定量方式来看,利用高效液相色
谱和气相色谱法多采用外标法定量,很少用到内标1材料与方法
法,而气质联用法在定量方式主要采用内标法定量。1.1材料与仪器
从采用的前理处理方法来看,主要有溶剂稀释法
花生油、油茶籽油、葵花籽油、米糠油、芝麻油
SPE柱法和皂化法。溶剂稀释法直接进样,不仅会污玉米油、特级初榨橄榄油、大豆油8种植物油∷市售。
染色谱柱,缩短色谱柱使用寿命,而且杂质峰较多,
氢氧化钾、乙醇、无水硫酸钠均为分析纯正己
影响与目标峰的分离;SP柱法虽说能去除大部分油烷为色谱纯∷角鲨烯标准品(≥98%)、5-胆甾烷标
基金项目:十三五”国家重点研发计划(2016YHDO401403-3)
准品:美国 sigma公司;角鲨烷标准品(≥98%):东京
收稿日期·2016-12-26
化成工业株式会社:ニ十四烷标准品、正三十二烷标
作者简介:朱琳,女,1984年出生,助理研究员,生物工程
通讯作者薛雅琳,女,1960年出生,教授級高级工程师,粮油品
准品:北京百灵威科技有限公司。
质及标准研究
7890A气相色谱仪(FID检测器):安捷伦(A9
21994-2018ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net
中国粮油学报
2017年第12期
lent)公司;旋转蒸发仪∷瑞士步琪( Buchi)公司;氮吹气相色谱法测定的内标物质。
仪美国 Oroanomation公司。
2.2内标加入量的选择
1.2试验方法
经查阅文献,内标加入量建议在待测物质的浓
1.2.1标准品的配制
度曲线的1/6~1/3处?。1~160gmL角鲨烯与
准确称取25mg角鲨烯、25mg角鲨烷标准品分峰面积的标准曲线见图1,内标角鲨烷加入质量浓度
别用正己烷定容于25mL容量瓶,即配制成1
范围应为27~53wg/mL。因此,加入终质量浓度为
角鲨烯标准储备液和1mg/m内标角鲨烷标准溶液。30pg/mL内标溶液可以满足定量要求。
1.2.2样品前处理
准确移取300μ.角鲨烷内标溶液于250m.磨
100r--内标浓度范
90
口烧瓶中,在氮吹仪上欥干后,准确称取0.2~2g样
80
R2-0.99y8
品于此烧瓶中,其余步骤同文献)]。
60)
1.2.3色谱条件
气相色谱柱HP-5毛细管柱,长30m,内径
0.32mm,薄膜厚度0.25pm;載气∷高纯氮气(纯度
99.999%),恒压:16psi,分流比1:10;进样口温度
250℃;柱温采用程序升温方式,以15℃/min的速
质量泳度/mL18
率从160℃升温到220℃,保持2min,然后以
图1角鲨烷内标加入量范围
5℃/min的速率升温到280℃,保持20min最后以2.3样品称样量的确认
5℃./min的速率升温到300℃,保持2min:FID检测
根据本方法样品最终定容至10m.正己烷中
器:温度300℃,氯气流速40m./min,空气流速450则对于角鲨烯含量≤800mg/kg的植物油,加入终质
mL/min,尾吹气流速30mL/min:;进样量:1.0pL
量浓度为30g/ml.角鲨烷内标,待测角鲨烯质量浓
度最高为160pg/mL,则推荐称样量为2g可满足定
2结果与分析
量要求范围。
2.1内标物质的选择
经查阅文献可知,在植物油中橄棁油的角鲨烯
采用内标法定量时,内标物的选择是一项十分含量较高,最高可达7000~-8000mg/kg,对于角鲨
重要的工作。内标物选择的原则为内标物应当是试烯>800mg/kg的植物油,加入终质量浓度为30
样中不存在的纯物质,这样内标物能准确加到样品μg/m角鲨烷内标,待测角鲨烯质量浓度最高为160
中去;内标物应当和被分析的样品组分有基本相同μg/mL,则推荐称样量为0.2g可满足定量要求范
或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、围。因此根据样品角鲨烯含量不同,称量样品进行
挥发度及在溶剂中的溶解度等)色谱行为和响应特测定。
征,最好与被分析物质为同系物;同时,在色谱分析2.4方法学评价
条件下,内标物必须能与样品中各组分充分分离。2.4.1校正因子
根据以上特点,本