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研究论文
阿魏菇凝集素分离纯化及理化性质的研究
杨爱霞,李应彪,许程剑
(石河子大学食品学院,新石河子832000)0
摘要:通过对新阿魏菇凝集素的提纯及分析,了解凝集素的基本理化特性,为深入探究阿魏菇
凝築素的免疫调节活性在理论上莫定了基础。对阿魏掂组织实体打浆、PBS漫提、碱酸沉淀、冷
冻千爆,DEAE- -cellulose、 Sepharse_4B等层析柱法分高纯化得到较为纯净的凝集素。米用小鼠血
液测定凝築凝築效价的方法初步研究凝集肃的理化性质。分离纯化得到较为纯净的凝集素,此
凝集素在度升高至70℃时,凝血活性全部喪失;pH4-9条件下,凝集素活性較为稳定,在pH2
以下及pH10以上凝集素活性逐渐消失。盐度升高,凝集素活性降低;D-半乳糖是其良好的抑制
剂;金属离子对凝集活性的影响各不相同。
关词:凝集素;分离纯化:凝血活性
中图分类号:Q949.3文献标志码:A文章编号:1673-1689(2014)01-0034-07
Study on the Extraction, Purification and Properties of
Lectin from the Pleurotus ferulae Lenzi
YANG Aixia, LI Yingbiao, XU Chengtian
College of Food Science, Shihezi University, Shihezi 832000, China)
Abstract The purpose of this study was to extract and purify one lectin from the Pleurotus ferulae
Lenzi, the basic physical and chemical properties of lectins were obtained, and build a solid
foundation at the further PPL s exploration in the immunomodulatory activity in theory. The highly
purified lectin received through PBS extraction of fruit body mash, salting out with ammonium
sulfate, freeze-drying, ion-exchange chromatography and Sepharose-4b affinity chromatography
Determinate the titer of hemagglutination by mice blood and the hemagglutinating effect a
preliminary study on the physical and chemical properties of the lectin, The hemagglutination
activities of PPL was destroyed after treatment with temperature higher than 70C or the PH lower
than 2 and higher than 10. The qualities of the lectin are stable in the PH 4-9. when the Salinity
increase, the activity decrease and D-galactose is the best inhibitors of letins, cations have different
effects on the hemagglutinating activity of lectin
Keywords: leclin, purify, irnrunornodulatol
收稿日期:2013-10-09
基金项目:国家自然科学基金项目(31101256);石河子大学高层次人オ科研启动项目(RCZX201021)。
通信作者:许程剑(1978一),男,安徴庐江人,工学博士,副教授,主要从事天然活性物质功能的研究。E-mail:3119]@gq.com
34 Journal of Food Science and Biotechnology Vol33 No.1 2014
万方数据
研究论文
杨爱質,等:阿魏菇凝集素分离纯化及理化性质的研究
阿魏菇,又名阿魏側耳( Pleurotus ferulae Lenzi)琪特分析仪器有限公司产品;FDU-1200真空冷冻
阿魏虅,属担子菌亚门层蘭纲伞菌目侧耳科侧耳属干燥机: Tokyo Rikakikai,TD产品; Ultrospec-5300
,是干旱草原上具有代表性的蕈菌。原产于新疆草紫外分光光度仪: Amersham生物科技公司产品。
原、戈壁野生阿魏根茎上,国内仅分布于新疆塔城、
阿勒泰地区。其子实体肉质肥厚,鲜嫩可口并且香
2实验方法
味浓郁。而且此类菌含有丰富的蛋白质、碳水化合2.1凝集索粗提
物、维生素、矿物质2以及凝集素等,阿魏菇还在抗
取迁量的成熟优质阿魏菇,用打浆机打碎阿魏
肿瘤,抗疲劳,抗诱变等免疫调节方面都有良好菇组织,02 mol/L PBS浸泡过夜;第二天对浸泡液
的开发利用前景。
8000 r/min离心20min,弃沉淀,保留上清液待用;
凝集素是一类具有选择性地、非共价可逆结合用石油醚萃取法去除上清液中的脂肪,待石油醚挥
细胞表面糖链的蛋白质或糖结合蛋白回。它广泛存发干净后用体积分数70%锍酸铵的沉淀上清液中
在于植物、动物等生物细胞膜上、细胞质内和细胞的蛋白质,搅拌6-8h,8000rmin离心20min,收
外基质中。其最大的特点在丁它们能识别糖蛋白和集沉淀弃去上清液,将沉淀再次溶解于质量分数
糖脂。凝集素对糖的特异结合性决定了它在动植物70%的饱和硫酸铵,再离心收集沉淀溶解于PBS溶
体内具有一些重要而特殊的生物学功能,利用这些液中,透析除盐36-48h,真空冷冻干燥即得凝素
功能,可以提取出大量对生物养殖、生物工程、疾病粗品。
防治等方面展示出广周的应用前景的凝集素。由此2.2凝集素分离纯化
可以看出对新疆阿魏菇凝集素的提取与理化性质2.2.1超滤超滤?是一种加压膜分离技术,即在
研究的必要性是显而易见的
定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径
的特制的薄膜,使大分子溶质不能透过,从而使大
材料与方法
分子物质得到了部分的纯化。将凝集素粗品溶解
1.1材料与试剂
经过超滤装置截留样液一定相对分子质量大小,超
材料:阿魏菇:采于新疆阿勒泰天山地带;小滤6~8h,期间补加蒸馏水4次,收集截留下来的样
鼠:石河子大学医学院动物饲养中心提供。
品A备用。
试剂:硫酸铵(分析纯):天津市光复科技发展2.2.2DEAE- cellulos52层析将样品A装柱于
有限公司产品;Tnis(纯度>99.9%);丙烯酰胺(电泳直径为1.1cm,柱长30cm层析柱,填料DEAE
级):北京鼎国长生生物技术有限公司产品;甲又双 cellulose52进行分离纯化,分别用浓度为
丙烯酰胺(电泳级):北京鼎国长生生物技术有限公0.1,0.2,0.3,0.4,0.5molL的NaC溶液进行洗脱,
产品;D-半乳糖(分析纯):上海蓝季科技发展有用自动集样器收集洗脱液各15管,28