WST 355-2011 血清甘油三酯的酶法测定.pdf

ICS1.020
中华人民共和国卫生行业标准
血清甘油三酯的酶法测定
Guidelines for enzymatic measurements of serum triglycerides
2011-12-14发布
2012-06-01实施
中华人民共和国卫生部发布
WS/T355-2011
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草,
本标准参考中华医学会检验学会《血脂测定推荐方法、中华医学会检验分会血脂专家委员会《关于
临床血脂测定的建议》制定
本标准由卫生部临床检验标专业委员会提出
本标准起草单位:卫生部北京老年医学研究所
本标准起草人:王抒、军、陈文祥,
WS/T355-2011
血清甘油三酯的酶法测定
范围
本标准规定了血清甘油三酯酶法测定及其质量保证的基本原则。
本标准适用于临床实验室和流行病学及营养调查中的血清甘油三酯测定。生产厂商制备甘油三酯
酶法测定试剂盒也可参照使用
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
分析系统 analytical system
对某检验项目在规定浓度范围內,给出分析结果的一组按规定条件使用的仪器和装置,包括試剂和
物品
改自ISO/IEC导则99:2007,3,2测量系统 mcasuring systerr
注1:对于临床生物化学检验,分析系统主要由按规定条件使用的仪器、试剂和校准物组成
注2:其他标准(如GB/T225762008)中的类似概念为“检验程序”,但检验程序包括更广泛内容,对于本标准,分
析系统相当于检验程序的分析部分。
验证 verification
提供客观证据,考虑任何测量不确定度,说明给定事物满足规定要求。
IS/IEC导则99:2007,2.44
注1:本标准主要是指分析系统的验证,即某分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能
指标一致
注2:有关概念是“确认"( validation),即“规定要求”满足指定用途的验、本标准的验证包含确认的含义
甘油三酯 triglyceride
甘油三酯是指甘油的三脂肪酸酯,形成甘油三酯的脂肪酸有多种,因此甘油三酯是一组化合物,而
不是分子组成和结构固定的单一化合物。此外,血中还存在少量甘油二酯、甘油一酯和游离甘油(正常
情况下甘油二酯和甘油一酯之和不足甘油三酯的3%,游离甘油约0.1mmol/L)。甘油三酯重量多以
三油酸甘油酯(相对分子质量885.5)计。
3方法概述
总甘油测定
ヨ前临床实验室普遍采用醇法测定血清甘油三酯。首先,用脂肪酶水解甘油三酯为甘油和脂肪
酸,然后,以多种方法测定其中的甘油部分。通常先用甘油激酶和三磷酸腺苷(ATP)将甘油酸化,生
成磷酸甘油或二磷酸腺昔(ADP),用氧化酶或脱氢酶检测磷酸甘油,也有用丙嗣酸激酶检测ADP。多
数情况下测定的结果是总甘油,即包括甘油三.、甘油二酯,甘油一酯和游离甘油之和。
WS/1355-2011
去除游离甘油的方法
需要除去游离甘油时、常用以下两种方法
外游离甘油空白法:分别用含脂酶和不含脂肪酶的试剂分析样品,以测定样品的总甘油和游
离甘油,自总甘油中减去游离甘油得甘油三酯
)内游离甘油空白法,有两种基本模式:
)将试剂中的脂肪醇与其他试剂成分分开,样品先与不含脂肪的试剂混合,温育后测定吸
光度,加人脂肪酶并温育后再测定吸光度,用两吸光度之差计算甘油三酯浓度,多见于使
用NAD/NADH氧还反应的方法
2)仅限于使用 Grinder反应的方法,第一步试剂除不含脂肪酶外,也不含4-氨基安替比林
将样品与第一试剂混合并混育一定时间后,加入含脂肪酶和4-氨基安替比林的第二试剂
温育后测定,由于第一步反应系统中不含脂肪酶及4-氮基安替比林,游离甘油产生的过
化氢在过氧化物酶的作用下与另一色原(酚类化合物)反应产生尢色物质,因此在加人第
试剂之前不需测定吸光度:第二步反应中的脂肪酶可有效消余乳糜样品的混浊,且
rinder反应产物的最大吸收波长多在500nm以上,可只做试剂空白,样品浇浊对测定
结果影响较小。内游离甘油空白法不增加样品和试剂用量.但试剂需分两步加入,也不能
获得样品的游离甘油含量。
4分析系统
4.1酶试剂
选用的血清甘油:酯酶法测定试剂盒中的酶试剂应能符合以下质量要求:
能水解99%以上的血清甘油三酯;
持异性高,干扰因素少;
在37℃与血清反应达终点所需时间小于5min,终点时吸光度至少能稳定60m:n
在血清甘油三酯浓度0mmol/L~1].29mmol/L(0mg/dL~1000mg/dL.)范围内,吸光度与
浓度呈通过原点的直线关系;
试剂溶液在测定波长下的吸光度小于0.05
在规定温度下保持稳定1年
试剂批间差小于1
4.2校准物质和质控物
酶法测定甘油三酯使用的校准物和质控物应符合如下要求
可使用血清校准物,在测定总甘油的方法中也可使用甘油水溶液校淮物;
使用校准物的甘油三酯浓度应在我国人血清甘油三酯水平高低划分界限(见附录A)附近,在
所选用的试剂、仪器条牛下能使新鲜样品测定结果可溯源到甘油三酯参考系统(见附录B);
使用时应将校准物的温度升至室温并充分混匀。冰冻融化后的血清校准物质可于2℃~8℃
贮存3d,不可反复冻融;
制备质控物应认真选择原料和工艺,使其具有与样品相同或相似的物理、化学性,贮存于
20℃以下;如果是冰冻或冻千血清制备的质控物质融化或复容后应使其温度升至室温,充
分均匀;融化后的质控物质可于2℃:-8℃贮存3d不可反复冻融。甘油三酯浓度在我国人血
清甘油三酯水平高低划分界限(见附录A)附近